Métodos de investigação histológica. A histologia atual dispõe de um amplo arsenal de diferentes métodos de investigação. Todos esses métodos dependem do uso de um dispositivo especial - um microscópio e, portanto, são todos métodos microscópicos.
Começarei cuidadosamente a investigar o objeto sob investigação, e esses métodos serão divididos em vitais (ou supravitais), se estiverem envolvidas células vivas, tecidos, órgãos e organismos inteiros, e pós-vitais, se estiverem investigando objetos fixos e mortos .
O desenvolvimento do método pós-vital, ou método de preparação de um preparo histológico permanente, ocorreu paralelamente ao desenvolvimento da ciência da histologia na outra metade do século XIX. Isso também é chamado de método da histologia clássica. Este método, denominado técnica histológica ou microscópica, requer preparação completa do objeto de investigação. Continua sendo objeto de redação especial, para atingir grandes devedores. Um aluno que começa a estudar histologia deve se familiarizar com as técnicas básicas de preparação de preparações histológicas para entender melhor as preparações e aprender a analisar, “ler” e até mesmo os espécimes histológicos mais recentes. E os medicamentos são amplamente utilizados tanto no processo inicial e na pesquisa científica.
A primeira etapa do preparo do medicamento é a retirada do material. Esta etapa, como todos os ataques, é seguida pelo fim da última lesão ao objeto. Portanto, ao fazer cortes em um órgão ou tecido, é necessário usar facas e lâminas afiadas, e não apertar o tecido com pinças. As peças são retiradas em tamanhos pequenos - cerca de 1 cm3 (mais de 7x7x3 mm). O material deve ser fresco e deve ser retirado o mais rápido possível após a morte de uma criatura experimental ou de uma pessoa.
A próxima etapa é a fixação do material, que envolve apertar o ponto retirado e fixar as bordas. O objetivo desta etapa é a consolidação de estruturas histológicas e macromoléculas no local onde estava o cheiro do objeto vivo. Em primeiro lugar, os fixadores minimizam as alterações nas estruturas estabelecidas, ou pode utilizar a seleção de agentes fixadores especiais para reduzir essas alterações ao mínimo. Os fixadores incluem álcoois (etílico, metílico), derivados de formalina, sais metálicos importantes e ácidos (octova, picrina, ósmio). Na maioria das vezes, existem vários sacos dobráveis de fixação que incluem os nomes dos componentes de vários compostos.
A terceira etapa é regar o material fixado. Para tanto, são utilizados álcoois de concentrações variadas, de modo que aumentem gradativamente de 50-70 a 100 graus. A impermeabilização é necessária na próxima etapa - um objeto reforçado, encontrado em parafina, celulose e resinas sintéticas. É importante que a maioria dessas resinas não se misture com água e, portanto, para que penetrem no material é necessário retirar cuidadosamente a água do tecido e em seguida embebê-lo com xileno (tolueno, benzeno), ou resina, que decompõe bem a parafina, bem como misturar com álcool etílico a 100 graus. Depois de infiltrar o objeto com parafina rara a uma temperatura de 55-5°C, deixa-se endurecer à temperatura ambiente juntamente com a parafina em formas especiais. É assim que se controla o bloco de parafina. Este procedimento é chamado de preenchimento. Existe uma maneira mais rápida de congelar restos de tecido com gelo seco (dióxido de carbono) ou nitrogênio raro, a estrutura dos objetos histológicos estudados é preservada em diferentes momentos.
O material reforçado permite produzir seções finas (5-7 µm de espessura), finas (0,5-1 µm) que podem ser vicorizadas para microscopia óptica e vicorizadas ultrafinas para microscopia eletrônica e visão (0,05-0,2 µm). A preparação dos cortes é realizada em micrótomos especiais (para microscopia óptica) e ultramicrótomos (para microscopia eletrônica). Seções finas, finas ou ultrafinas são claras para trocas de luz ou feixes de elétrons com objetos e permitem que sejam examinadas em microscópios de alta qualidade. Para dissecar os detalhes estruturais de um objeto, muitos dos quais não possuem dimensões naturais, é necessário separá-los pela necessidade de preparo (para imagens em microscópio de luz) ou contraste (para microscopia eletrônica).
A histologia possui uma variedade de métodos para preparar preparações e compostar uma variedade de bérberis diferentes, que devem ser seguidos. Histologicamente, as bérberis são divididas em silvestres, silvestres e sintéticas (anilina). O fruto das amoras é a hematoxilina, extraída da casca da árvore que cresce na América Central, e uma substância encontrada nos mosquitos - o bagre. A grande maioria das bérberis são sintéticas - eosina, fucsina, azul, etc.
O mais importante é a classificação histológica das bérberis para autoridades químicas, então há uma série de termos que ficarão mais claros ao longo do curso. Portanto, segundo as autoridades químicas, as bérberis histológicas são divididas em ácidas, básicas e neutras. As propriedades das bérberis ácidas são classificadas pelos grupos -COOH, -HS03, H2P03, que são chamados de bérberis aniônicos. As amoras ácidas contêm o citoplasma da celulite, são chamadas de citoplasmáticas. O fundo dessas amoras pode ser eosina (dá uma cor avermelhada brilhante), verde claro (dá cor verde). As estruturas histológicas preparadas com amoras ácidas são chamadas de oxifílicas (acidofílicas, eosinofílicas). Estes, por exemplo, são grânulos citoplasmáticos de leucócitos eosinofílicos, fibras de colágeno, etc.
Os principais compostos são catiônicos, o importante é que a maioria deles possui uma molécula carregada positivamente com átomos de nitrogênio. O nome barvnikov fertiliza seletivamente os núcleos das células e, portanto, são chamados de nucleares. O estoque pode ser hematoxilina (farb na cor azul-violeta), carmim (na cor vermelho claro), safranina (na cor vermelho escuro), azul II (na cor azul). As estruturas histológicas formadas pelas cracas principais são chamadas de basofílicas. Estes são grânulos no citoplasma dos leucócitos basofílicos, nos núcleos das células, etc.
As bérberis neutras são estabelecidas na presença de variedades aquáticas de bérberis ácidas e básicas, por exemplo, ácido eosínico azul de metileno. Além disso, as bérberis neutras devem ser separadas se houver bérberis básicas e ácidas ao mesmo tempo. Estruturas que contêm bérberis básicas e ácidas são chamadas de perfil neutro ou policromatofílicas. A extremidade pode ser grânulos de leucócitos com perfil neutro, citoplasma de eritroblastos policromatófilos, etc. A presença de estruturas histológicas alterando a cor da craca principal é designada pelo termo metacromasia. A granularidade dos leucócitos basofílicos, do tecido intercelular do tecido cartilaginoso, etc. é latida metacromaticamente. Uma das bérberis mais consumidas é a hematoxilina e a eosina.
Existem cremes especiais de bérberis azedos, básicos e neutros que podem ser usados para identificar vozes ou estruturas cantadas. Por exemplo, o Sudão III adiciona tecidos gordurosos à cor laranja e a orceína adiciona fibras elásticas aos marrons.
As preparações preparadas devem dissolver-se em álcoois, tornar-se visíveis no xilol, depois despejar uma bola fina de bálsamo do Canadá e cobrir com um copo curvo. Depois de secar o bálsamo, você receberá um medicamento permanente que poderá usar por muito tempo. Para a microscopia eletrônica, os cortes são feitos em ultramicrótomos, colocados em grades especiais, contrastados com sais de urânio ou chumbo, visualizados ao microscópio e fotografados. As microfotografias foram retiradas do objeto e tratadas simultaneamente com preparações histológicas.
Além das descrições de cortes finos, existem também outros tipos de preparações histológicas, que são significativamente mais raras, principalmente em alguns casos. Antes deles estão esfregaços (sangue, líquido cefalorraquidiano, muco, etc.), esfregaços (fígado, timo, membrana mucosa da membrana sebácea), esfregaços (contendo tecido, pleura, membrana cerebral, membrana miópica), preparações totais (sementes) estágios iniciais desenvolvimento, articulação).
Os métodos vitais (de sobrevivência) de rastreamento de células e tecidos permitem obter informações sobre quem passa pelos processos vitais, costura da bainha, bainha, crescimento, interação entre Esta é a minha reação a vários fatores. Os métodos de investigação estabelecidos são necessários para complementar esses dados, que foram obtidos pelo método da histologia clássica sobre células e tecidos humanos. Os estudos ao vivo são realizados em um organismo vivo ou in vivo. Para monitorar células vivas, métodos vicorísticos são utilizados para tratamento vital e administrativo. Para isso, são utilizadas amoras especiais que não são tóxicas para os tecidos vivos. Em caso de fertilização vital, a bérberis é introduzida no corpo de um animal vivo e as células de celulose são fermentadas seletivamente. Assim, as células do sistema macrófago são monitoradas quanto à introdução de azul de tripano ou carmim de lítio. A fermentação supravital é a fermentação de células vivas isoladas do corpo. É assim que os lisossomos (barvnik vermelho neutro), as mitocôndrias (verde Janus) e os reticulócitos sanguíneos (azul cresil-diamante) são revelados.
Para exame vital ou intravital, bem como pós-vital de objetos histológicos não preservados, são utilizados vários métodos especiais de microscopia óptica - contraste de fase, campo escuro, fluorescência.
O método de expansão de fase garante o contraste necessário antes de rastrear estruturas não absorvidas atrás da moldura de um diafragma de anel especial que se encaixa no condensador e na chamada placa de fase que se encaixa na lente. Este desenho da ótica do microscópio óptico permite reverter as mudanças de fase da luz que passa pelo objeto, na amplitude que marca o olho como a mudança no brilho.
Principal Objetos de investigação São preparações histológicas e o principal método de investigação é a microscopia.
A amostra histológica pode parecer transparente (fina) e contrastante. O vinho é preparado a partir de estruturas vivas e mortas (fixas). O medicamento pode ser utilizado como suspensão de tecido, esfregaço, líquido, fundido, preparo total e corte delgado.
O processo de preparação dos preparos histológicos para exame microscópico compreende as seguintes etapas principais: 1) retirada do material e sua fixação; 2) material reforçado; 3) preparação de corpos de prova; 4) preparação ou contraste de imagens; 5) colocação dos olhos.
Para o preparo são utilizadas bérberis histológicas especiais com diferentes valores de pH: ácido, neutro e básico. As estruturas por eles processadas são aparentemente chamadas de oxifílicas, neutrofílicas (heterofílicas) e basofílicas.
Que métodos a ciência histológica usa? O fedor é numeroso e variado:
Luz do microscópio. Os microscópios de hoje produzem dados de alta resolução. A separação é definida como a menor distância (d) entre dois pontos adjacentes que podem ser separados. Este valor deve ser mantido à luz por muito tempo (λ) e é expresso pela fórmula: d = 1/2 λ.
O valor mínimo da parte visível está na faixa de 0,4 µm. Portanto, a saída máxima do microscópio óptico passa a ser de 0,2 mícron e a capacidade máxima chega a 2.500 vezes.
Microscopia ultravioleta . O valor máximo da luz ultravioleta é de 0,2 mícron, porém, a parte separada do microscópio ultravioleta é de 0,1 mícron, e como a radiação ultravioleta é invisível, é necessário proteger o objeto que está sendo monitorado Nova tela luminescente.
Microscopia fluorescente (luminescente). A vibração de ondas curtas (invisíveis), que desaparece próximo aos rios, desperta seus elétrons, que se transformam em luz com a onda maior de longo alcance, permanecendo na parte visível do espectro. Dessa forma, buscam-se avanços nas partes separadas do microscópio.
Microscopia de contraste de fase Permite exibir objetos não salvos.
Microscopia de polarização O desenvolvimento da arquitetura de estruturas histológicas, por exemplo, fibra de colágeno, está sendo estudado.
Microscópio eletrônico dá a capacidade de torcer objetos, aumentando dezenas de milhares de vezes.
Microfotografia e microcinema . Esses métodos permitem capturar objetos em fotografias e objetos microscópicos vivos na Rússia.
História –e citoquímica , incluindo kolkisna, permite uma análise clara dos seguintes objetos nos níveis tecidual, celular e subcelular.
Citoespectrofotometria Torna possível tricotar kilkisny em vez destes e de outros materiais biológicos em tecidos e tecidos à base de pombos claros de cor argila com o barnberry tricotado com eles.
Centrifugação diferencial Permite separar as células que estão separadas umas das outras pela sua própria massa.
Radiografia Baseia-se na inclusão de um traçador radioativo (por exemplo, iodo radioativo, N-timidina, etc.) no processo metabólico.
Morfometria permite medir a área e o volume das células, seus núcleos e órgãos usando a ocular adicional de micrômetros e grades especiais.
Zastosuvannya EOM para processamento automático de material digital.
Método de cultura de tecidos Apoia a vitalidade do corpo e a estrutura das células e tecidos. Para isso, são criados recipientes especiais com meio vivo, nos quais são criadas todas as substâncias necessárias à vida das células. Usando este método, pode-se estudar a diferenciação e formação funcional das células, os padrões de sua degeneração maligna e o desenvolvimento do processo de inchaço, a interação intercelular, o nível de células e tecidos por vírus, etc. medicamentos nos processos de troca em clientes e tecidos, etc.
Prizhitteve (vitalne) farbuvannya É utilizado para estudar as manifestações de fagocitose e atividade de macrófagos, filtração de canais neuronais, etc.
Método de transplante de tecido. Este método baseia-se no método de alteração do comportamento das células e do seu estado morfofuncional quando são transplantadas para outro organismo. Por exemplo, este método é usado para sustentar a vida de criaturas fortes o suficiente para receber uma dose letal.
Micromanipulação. Esse método é baseado na biologia molecular, na engenharia genética e também na clonagem, quando, por meio de um micromanipulador, é retirado o núcleo de um óvulo com um conjunto haplóide de cromossomos e nele é transplantado o núcleo de uma célula somática. e com um conjunto diplóide de cromossomos.
Assunto de histologia. Métodos de investigações histológicas. A teoria de Klitin.
INTRODUÇÃO À HISTOLOGIA. BUDOVA KLITINI.
Aula 1
Histologia– esta é a ciência da vida, o desenvolvimento e a vitalidade dos tecidos da matéria. Os tecidos são tecidos a partir de corpos vivos e não vivos. O exame de objetos histológicos e suas estruturas sutis é feito com o auxílio de microscópios, que ampliam centenas de milhares de vezes detalhes invisíveis a olho nu.
O curso de histologia é inteligentemente dividido nas seguintes seções:
1. A citologia é a ciência das células.
2. A Embriologia é a ciência do desenvolvimento, desde o nascimento até à formação final do corpo.
3. A histologia secreta é a ciência dos padrões secretos que governam os tecidos.
4. Histologia privada - a ciência de Budova, o desenvolvimento de órgãos e sistemas.
As principais tarefas da histologia como disciplina é obter conhecimento sobre tecidos microscópicos e ultramicroscópicos, tecidos de órgãos e sistemas de um corpo saudável, e a conexão neurológica com seu desenvolvimento e funções estabelecidas.
Os principais métodos de exame histológico são a microscopia e métodos especiais (não microscópicos) (histoquímica, citofotometria, autorradiografia, etc.).
Os objetos de investigação podem ser células e tecidos vivos ou mortos (fixos).
Para examinar células e tecidos, preparações histológicas são preparadas ao microscópio.
Os principais métodos de exame de objetos histológicos são a microscopia óptica e a microscopia eletrônica, amplamente utilizadas na prática clínica e experimental.
Microscópios ópticos de luz. A parte óptica principal do microscópio é dobrada na lente e na ocular. A lente possui o sistema óptico mais confiável, que fornece uma imagem maior do assunto. Uma ocular é um sistema óptico que funciona como uma lupa enquanto captura visualmente a imagem maior de um objeto fornecida pela lente. A ocular produz imagens maiores de 5 a 25 vezes.
Portanto, as características mais importantes de um microscópio são a sua eficiência e ampliação. Separação - distância mínima entre dois pontos do objeto, como pode ser visto de fora. A ampliação do microscópio é um valor que mostra quantas vezes as dimensões lineares da imagem formada pelo sistema óptico do microscópio são maiores que as dimensões lineares do objeto. Um microscópio maior vem de uma lente e ocular maiores e de um suprimento numericamente maior desses aumentos. Os microscópios ópticos de hoje variam até 1.500 vezes.
Microscópio eletrônico Os microscópios eletrônicos apresentam um alto nível de diversidade. Em outras palavras, em um microscópio eletrônico é teoricamente possível aprimorar os dados individuais e aparentemente aumentar a imagem 150.000 vezes mais do que em um microscópio de luz igual. Na maioria das vezes, em investigações morfológicas, são utilizados microscópios eletrônicos, que permitem medir a área da imagem do objeto sob investigação. No futuro, microscópios eletrônicos raster (varredura) serão usados ativamente para criar imagens triviais, a fim de obter mais escopo para estruturas de imagem.
Métodos de investigação quantitativa de microestruturas em preparações histológicas e citológicas. Uma avaliação minuciosa das microestruturas é uma identificação mental necessária de dados objetivos sobre o seu estado em condições normais, em estudos experimentais e em patologia. Os principais indicadores das microestruturas são morfométricos (número de estruturas e seus parâmetros geométricos) e densitométricos, que refletem a concentração (potência óptica) discursos químicos em microestruturas. Para identificar esses parâmetros são utilizados métodos morfométricos e espectrofotométricos, além de sistemas automatizados de processamento de imagens.
A digitalização do organismo ao nível dos tecidos e das células requer a preparação de preparações histológicas e o seu exame ao microscópio. O método de preparação de um preparo histológico consiste em preparar o material para exame ao microscópio, a fim de obter clareza e contraste.
Muitas vezes, aplicar o material com uma aparência renovada é o mais eficaz (por exemplo, cuidar do trabalho do epitélio migratório). Para preparar o preparo, pegue um objeto limpo. No meio, coloque uma gota d'água ou solução fisiológica, enrole as amostras de tecido para facilitar a visualização e, sob o controle de um microscópio, endireite-as com cabeças de dissecação.
Para tornar o preparo mais contrastante e reduzir a capacidade de separação bem em torno de seus detalhes, o objeto é submetido a um preparo. Ao mesmo tempo, é importante notar que diferentes estruturas de tecidos e células reagem de maneira diferente entre si.
A preparação de preparações permanentes pode levar muito tempo e tais preparações podem ser processadas durante um longo período de tempo. As preparações são preparadas a partir de pequenos objetos inteiros (preparações totais) ou seções; Para todas as mentes, o objeto através da lente é sutil e perspicaz; caso contrário, é impossível examiná-lo ao microscópio.
A preparação do medicamento consiste em várias etapas.
2. Objetos de investigação histológica
3. Preparação de preparações histológicas
4. Métodos de investigação
5. Etapas históricas do desenvolvimento da histologia
1. Histologia a ciência da vida microscópica e submicroscópica, desenvolvimento e vitalidade dos tecidos dos organismos vivos. Além disso, a histologia é um dos principais aspectos da organização do tecido vivo. Estes são separados Iguais hierárquicos organização da matéria viva:
clitínico;
têxtil;
unidades estruturais e funcionais de órgãos;
órgão ruibarbo;
sistema ruibarbo;
ruibarbo orgânico
Histologia como disciplina inicial, inclui as seguintes seções: citologia, embriologia, histologia externa (envolvendo as funções biológicas dos tecidos), histologia privada (envolvendo o exame microscópico de órgãos).
O objeto principal O estudo da histologia é o corpo de uma pessoa saudável e, portanto, a disciplina original é chamada de histologia humana.
Tarefa principal Histologia refere-se às células, tecidos, órgãos feridos, ao estabelecimento de ligamentos entre vários objetos, ao estabelecimento de padrões ocultos.
A histologia, assim como a anatomia, se estende às ciências morfológicas, giradores de cabeça várias modificações nas estruturas dos sistemas vivos. Em vez da anatomia, a histologia estuda a matéria viva no nível microscópico e microscópico eletrônico. Neste caso, a modificação dos vários elementos estruturais será efectuada neste momento de acordo com as funções que lhes são atribuídas. Esta abordagem para a implantação de estruturas de matéria viva é chamada de histofisiológica, e a histologia é frequentemente chamada histofisiologia. Além disso, quando a matéria viva é implantada nos níveis celular, tecidual e orgânico, não apenas a forma, o tamanho e a distribuição das estruturas podem ser vistos, mas também a composição do tecido é frequentemente determinada pelo método de citoquímica e histoquímica. que criam essas estruturas. As estruturas que se desenvolvem devem ser examinadas em relação ao seu desenvolvimento, tanto durante o período intrauterino (embrionário) quanto ao longo da ontogênese pós-embrionária. Isto também explica a necessidade de incluir a embriologia antes do curso de histologia.
A histologia, como ciência, tem sua própria objetos e métodosÉ isso. Os objetos mais comuns utilizados para enxertia são tecidos, fragmentos de tecidos e órgãos, preparados de forma especial para enxertia ao microscópio.
2. Objetos de investigação são divididos em:
vivos (clinas em gotas de sangue, clitinas em cultura e outros);
morto ou fixo, que pode ser retirado de um organismo vivo (biópsia) ou de cadáveres.
De qualquer forma, depois de retirar os pedaços de papel, o fedor sucumbe a eventuais problemas de fixação ou congelamento. Para fins científicos e básicos, são utilizados objetos fixos. As preparações preparadas desta forma e depois analisadas para exame ao microscópio são chamadas de preparações histológicas.
Espécime histológico você pode ver:
tecido de órgão fino e barrado;
esfregaço na pele;
impacto na pele de um órgão rompido;
preparação de cuspe fino.
Uma preparação histológica de qualquer forma é responsável pelos seguintes efeitos:
salvar a vida das estruturas;
Certifique-se de ser fino e transparente para examiná-lo ao microscópio à luz que passa;
Se for contrastante, as estruturas que mudam são claramente visíveis ao microscópio;
As preparações para microscopia óptica devem ser preservadas e reutilizadas por muito tempo.
Estes podem ser alcançados dentro de uma hora de preparação do medicamento.
3. Veja isso etapas de preparação da preparação histológica
Pegue o material(Um pedaço de tecido ou órgão) para preparar o medicamento. Neste caso, a coleta do material deve ser realizada antes da morte ou morte do animal, e se possível, na forma de objeto vivo (biópsia), para que as estruturas do corpo, tecido ou órgão fiquem mais bem preservadas ; O parcanismo da costura deve ser feito com ferramenta padrão, para não danificar o tecido; O tecido da peça não precisa ser esticado demais em 5 mm, para que a marca de fixação possa penetrar no tecido da peça; Os itens devem ser marcados (nome do corpo, número da criatura ou apelido da pessoa, data da coleta, etc.)
Fixação do material necessário para acelerar os processos metabólicos e preservar as estruturas da decomposição. A fixação é conseguida na maioria das vezes usando uma cunha de papel em um meio de fixação, que pode ser álcoois simples e formalina e agentes de dobramento de Carnoy, fixador de Zinker e outros. O fixador causa a desnaturação das proteínas e, assim, acelera os processos metabólicos e preserva as estruturas em seu estado original. A fixação também pode ser obtida por congelamento (resfriamento com CO2, nitrogênio raro, etc.). A gravidade da fixação é determinada pela última camada de tecido ou órgão da pele.
Enchimento de roupas no meio do desfiladeiro(parafina, inteiras, resinas) ou congelamento para posterior preparação de lâminas finas.
Preparação de fatias em ferramentas especiais (microtomia ou ultramicrotomia) usando facas especiais. As fatias para microscopia óptica são coladas em uma lâmina e para microscopia eletrônica são montadas em malhas especiais.
Zabarvlennya zrіziv ou não há contraste (para microscopia eletrônica). Antes de barrar os cortes, retira-se o meio espessado (desparafinização). Os barris alcançam o contraste das seguintes estruturas. As bérberis são divididas em básicas, ácidas e neutras. Os mais utilizados são os bérberis básicos (chamados hematoxilina) e ácidos (eosina). As cracas dobráveis geralmente crescem de forma vitorística.
Iluminação dos olhos(em xileno, tolueno), colocado em resina (bálsamo, poliestireno), coberto com vidro curvo.
Após esses procedimentos sequenciais, o medicamento pode ser examinado ao microscópio óptico.
Para fins de microscopia eletrônica nas etapas de elaboração dos preparos há particularidades, ou princípios fundamentais próprios. A principal preocupação reside no fato de que o preparo histológico para microscopia óptica pode ser guardado por um período muito difícil e estar livre de contaminação. Fatias para microscopia eletrônica são descartáveis. Quando o primeiro objeto é preparado, é necessário excretar, fotografar e a implantação das estruturas é feita por meio de eletrogramas.
De tecidos de rara consistência As preparações (sangue, líquido cefalorraquidiano, etc.) são preparadas a partir do aparecimento de um esfregaço em uma lâmina, que também são fixadas, preparadas e depois testadas.
Órgãos parenquimatosos frágeis Zi(fígado, nirka e outros) são preparados preparativos para o aparecimento do órgão: após um órgão quebrado ou rompido, um objeto é aplicado no órgão fraturado, sobre o qual são colados os decalques do tecido. Então o medicamento é fixado, preparado e administrado.
Zrestha, de corpos ativos(brisa, polpa da membrana cerebral) ou a partir de tecido compósito fibroso fofo, as preparações de flotação são preparadas por estiramento ou esmagamento entre dois copos, também com fixação escalonada, descascamento e vazamento em resina.
4. O principal método de investigação objetos biológicos que são analisados em histologia banho de microscópio, Ou seja, o exame de preparações histológicas ao microscópio. A microscopia pode ser um método independente de tratamento, mas outros métodos (histoquímica, historradiografia, etc.) podem ser usados. Vale lembrar que para a microscopia são utilizados diferentes designs de microscópios, que permitem a leitura de diferentes parâmetros dos objetos que estão sendo medidos. Estes são separados tipos de microscopia:
microscopia óptica (tamanho separado 0,2 µm), o tipo mais avançado de microscopia;
microscopia ultravioleta (tamanho separado 0,1 mícron);
microscopia luminescente (fluorescente) para identificar substâncias químicas em estruturas visíveis;
microscopia de contraste de fase para implantação de estruturas em preparações histológicas não preservadas;
microscopia de polarização para implantação, classificação da cabeça, estruturas fibrosas;
microscopia de campo escuro para imagens de objetos vivos;
Microscopia de luz incidente para exame de objetos sólidos;
microscopia eletrônica (faixa separada de até 0,1-0,7 nm), dois tipos de microscopia eletrônica translúcida (transmissão) e microscopia de varredura ou raster fornecem imagens da superfície de ultraestruturas.
Métodos histoquímicos e citoquímicos permite determinar o armazenamento de substâncias químicas e determinar sua resistência em estruturas em tratamento. O método baseia-se em reações químicas realizadas com um reagente e substâncias químicas encontradas no substrato, com um produto de reação criado (contraste ou fluorescente), que é então detectado em microscopia óptica ou luminescente sem microscopia.
Método histoautorradiográfico permite identificar o armazenamento de substâncias químicas nas estruturas e a intensidade da troca pela inclusão de isótopos radioativos para rastrear as estruturas. O método é mais frequentemente usado em experimentos com animais.
Método de centrifugação diferencial permite que você torça organelas e enrosque fragmentos visíveis do tecido. Para isso, triturar o tecido do órgão, preenchê-lo com solução fisiológica e depois centrifugá-lo em diferentes embalagens (de 2 a 150 mil) e separar as frações a serem coletadas, que depois torcem com diferentes métodos.
Método de interferometria permite determinar a massa seca da fala em objetos vivos e fixos.
Métodos imunomorfológicos permite, além da realização preliminar de reações imunes, com base na interação antígeno-anticorpo, identificar subpopulações de linfócitos, determinar o estágio de estranheza das células, realizar tipagem histológica de órgãos teciduais (ou seja, histossuficiência) para Transplante de órgão.
Método de cultura de clitina(in vitro, in vivo) detecção de células em amostras ou em cápsulas especiais no corpo e testes adicionais de células vivas ao microscópio.
Existem apenas algumas espécies que são estudadas em histologia
Para visualizar estruturas em microscopia óptica, os micrômetros são importantes: 1 µm passa a 0,001 mm; na microscopia eletrônica, mude os nanômetros: 1 nm torna-se 0,001 mícron.
5. você história do desenvolvimento da histologia mentalmente veja três período:
Período pré-microscópico(do século IV aC a 1665 r.) associado aos nomes de Aristóteles, Galeno, Avicena, Vesalius, Falopia e é caracterizado por testes de visualização de tecidos heterogêneos (duros, moles, raros etc.) no corpo de animais e humanos e os melhores métodos de dissecção anatômica
Período microscópico(Z 1665 a 1950). O início do período está associado aos nomes do físico inglês Robert Hooke, que, em primeiro lugar, aprimorou o microscópio (lembre-se que os primeiros microscópios foram encontrados no início do século XVII), ou seja, que ajudou ele para pesquisas sistemáticas deles, desse número de objetos biológicos e publicação dos resultados desses estudos em 1.665 rublos. No livro “Micrografia”, do século III, primeiro, foi introduzido o termo “klitina” (“celulum”). O desenvolvimento de microscópios e o desenvolvimento de seus tecidos e órgãos biológicos continuaram.
Foi dado especial respeito à vinha de Budova. Jan Purkinje descreveu a presença de “protoplasma” (citoplasma) e núcleos em células de criaturas, e mais tarde R. Brown confirmou a presença de núcleos e células na maioria das criaturas. O botânico M. Schleiden ficou preso nas atividades das células com citocinese. Os resultados desses estudos permitiram a T. Schwan, com base em suas informações, formular a teoria de Clint (1838-1839) em termos de três postulados:
todos os organismos em crescimento e criados são compostos de células;
todas as células se desenvolvem de acordo com o princípio fundamental dos citoblastomas;
A célula da pele tem vitalidade independente e a vitalidade do corpo é a soma da atividade das células.
No entanto, R. Virkhov (n. 1858) não esclareceu que o desenvolvimento das células é influenciado pelo caminho sob a célula de saída (se a célula é da célula). Os princípios desenvolvidos por T. Schwan, a teoria climática, ainda são relevantes hoje, embora sejam formulados de forma diferente.
Disposições atuais da teoria celular:
a célula é a menor unidade dos seres vivos;
células de criaturas e organismos semelhantes à sua família;
A reprodução das células é gerada por um caminho sob a célula de saída;
Organismos multicelulares são conjuntos complexos de células e similares, unidos em sistemas de tecidos e órgãos, interligados por formas de regulação celular, humoral e nervosa.
O desenvolvimento dos microscópios, especialmente o uso de lentes acromáticas, permitiu identificar diferentes estruturas nas células:
Centro clínico Hertwig, 1875;
aparelho particulado ou complexo parcial de placa Golgi, 1898;
Mitocôndrias de Bend, 1898
Estágio atual O desenvolvimento da histologia começou em 1950. Desde o início da descoberta do microscópio eletrônico, a implantação de objetos biológicos, embora o microscópio eletrônico tenha sido encontrado anteriormente (E. Ruska, M. Knoll, 1931). No entanto, o atual estágio de desenvolvimento da histologia é caracterizado pelo uso não apenas do microscópio eletrônico, mas também de outros métodos: histoquímica citoquímica, historradiografia e outros métodos exagerados. Neste caso, é utilizado um complexo de técnicas variadas, que permite não só indicações claras das estruturas afetadas, mas também a identificação de características precisas. Particularmente amplamente utilizadas são várias técnicas morfométricas baseadas em sistemas automatizados para processamento de informações capturadas por meio de computadores.
Aula 2. Citologia. Citoplasma
Os objetos de investigação podem ser células e tecidos fixos (mortos) ou vivos.
Para investigar a microestrutura de queijos e produtos alimentícios, via de regra, são utilizadas vicorísticas de tecidos fixos e tecidos. Os medicamentos são instantâneos, destinados a uma injeção única, ou permanentes, que podem ser salvos e monitorados extensivamente. Além disso, são utilizadas preparações totais e completas.
Preparativos oportunos Você pode preparar um shvidko achatado; Para isso, fixa-se o material e fazem-se cortes em micrótomo, que é congelado; se disponível, pode-se fazer um fino corte de tecido ou órgão com bisturi ou lâmina. Descasque os cortes, coloque-os sobre uma lâmina de vidro, aplique uma gota de glicerina e cubra com um vidro curvo. Para identificar o amido, dissolva o iodo no iodeto de potássio: dissolva 0,5 g de iodeto de potássio em uma pequena quantidade de água, adicione 1 g de iodeto cristalino e adicione água até 100 cm 3 . Aplique uma pitada de reagente em um pedaço fino de cowbass, pó ou outro material, espalhe em uma lâmina e o amido ficará com uma cor azul-violeta.
Preparações totais ou completas traçar sem remover o tecido do órgão. Por exemplo, um derramamento de celulose subcutânea ou um preparado triturado de raiz após fixação, lavagem e preparo deve ser colocado entre o objeto e o vidro curvo. Para identificar os demais elementos estruturais de pedaços fixos e fermentados de células pélvicas ou de tecido cárneo liso, depenar com a pele nua em uma lâmina - tais preparações são chamadas de pinçamento. Em alguns casos, por exemplo, após fixar e lavar a casca, não retire a mistura, pois nas células existem inclusões orgânicas (pigmento) que incham quando os parentes se estragam.
Métodos para preparar uma amostra histológica O principal método de enxerto de células e tecidos fixos é o histológico. investigação do tecido barrado, colocado em centro especial. Para cortar cortes, despeje o material acabado em parafina ou material inteiro, o que permite cortar cortes finos (5-7 µm ou 10-30 µm horizontalmente), para preparação suave de cortes (40-60 mícrons) use uma técnica isso vai congelar.
As principais etapas do preparo de um preparo histológico: amostragem, fixação, lavagem, rega, vazamento até parafina ou inteiro, preparo, assentamento sob superfície curva.
Seleção de amostra realizado para garantir a investigação e estrutura adequada do material. O tamanho da amostra não deve exceder em média 2,5-3,0 cm.Amostras de fígado e baço são retiradas da cápsula. Do coração são retirados fragmentos da parte anterior do coração, fragmentos da membrana são mais finos e em um preparo é possível determinar o aspecto topográfico do epicárdio, miocárdio e endocárdio. Do fundo, dos gânglios linfáticos e das glândulas supraneurais, são desenhados cortes de órgãos, de modo que o ângulo seja perpendicular à superfície para que as veias cervicais e cerebrais fiquem visíveis no preparo. Caso seja necessário preparar preparos para troca de órgãos, os restos do material traçado são cortados no cordão com a área afetada, de forma que a amostra perca a zona de transição da cavidade. As amostras de músculo esquelético devem ser cortadas de forma que as fibras da carne fiquem nas seções posteriores e transversais. Coloque amostras de carne picada, pai e demais ingredientes que forem peneirados primeiro sobre um pedaço de gaze e amarre com linha. É importante ressaltar que quando a cavidade torácica cresce, as pernas desmoronam devido à elasticidade, o que significa que perdem a leveza, depois inserem um copo ou tubo húmico na traqueia dos órgãos respiratórios e injetam-nos gradualmente. . Aplique uma ligadura de sutura na traqueia abaixo do tubo inserido e amarre uma sutura para fechamento completo. Para fixar o intestino, primeiro amarre a seção com ligaduras em ambos os lados ao órgão designado para fixação. As amostras são carimbadas com etiquetas de papel grosso etiquetadas com o número e a data da seleção da amostra.
Fixação, toto. salvando a arquitetura natural (viva), que é realizada para transferir o protoplasma vivo das estruturas para um estado imutável. O efeito dos fixadores se manifesta no fato de que nos tecidos e órgãos, como resultado de processos biofísicos, ocorre uma coagulação irreversível de proteínas. Retirando tecido de um órgão, é melhor prendê-lo em um fixador; A relação entre o material e a relação de fixação não é inferior a 1:9 (Fig. 3).
A fixação leva a um certo fortalecimento e mudança do dever de expressão. Os mais comumente usados para fixação são formaldeído 10-12%, álcool etílico e acetona. Para preparar a concentração especificada de agente fixador, 40% de formaldeído é diluído em água da torneira. O álcool etílico (100% absoluto ou 96%) é utilizado nestes casos, caso seja necessário identificar substâncias que estão dissolvidas em fixadores de água (por exemplo, glicogênio). O material de pesquisa (por exemplo, o cérebro) é fixado em acetona por mais de alguns anos. Se o órgão afetado, como o tecido cístico, for removido, é realizada descalcificação ou inflamação. Para fazer isso, abaixe um pequeno pedaço de pincel (ou melhor, pendure-o em um fio) em uma solução de 5-8% de água ácido nítrico, que é trocado 2 a 3 vezes por peça.O resultado da descalcificação pode ser avaliado inserindo uma cabeça fina na escova: se não houver suporte, a descalcificação está completa. Depois de tal pro-
Lavando ser realizado para retirar a parte teimosa do fixador, por exemplo, após a fixação com formalina, o enxágue é feito com água corrente da torneira.
Znevodnennya endurecer o material em álcool etílico com concentração inicial: 50-70-100. Para preparar álcool 50% e 70%, dilua o álcool 96% com água destilada. Para preparar o álcool 100%, é necessário fritar o sulfato de cobre até ficar completamente regado e adicionar álcool etílico 96% ao pó branco. Na concentração de álcool na pele, o material dura de 1 a 24 anos dependendo do tamanho do tecido, do órgão; Com álcool 70%, o material pode ser recortado esticando vários pontos.
Zalivannya ser realizado de forma que o acompanhamento dos olhos se torne difícil, o que permite manter visões sutis. Para tanto, utiliza-se parafina (período de percolação de 1 a 4 anos), material inteiro (período de permeação de três anos). Se forem encontradas gorduras, despeje gelatina para rastrear tecidos e órgãos fofos.
Visão use micrótomos trenó ou rotativos. As seções mais finas (5-7 mícrons) podem ser preparadas a partir de material embebido em parafina. O material preenchido com solidina é preparado com espessura de 15-20 mícrons. Para investigar a microestrutura de queijos e produtos alimentícios, via de regra, utiliza-se a tecnologia de congelamento. Isso acelera o preparo do medicamento e as três etapas de rega e alagamento são desligadas. Após fixação e lavagem, os tecidos do objeto são colocados em um micrótomo macio, que é congelado, e cortado em seções de 40-60 µm de espessura. As vistas são carregadas com um penzlik para a água, e o fedor se endireita, inchando com o aparecimento dos mais finos coágulos cinzentos.
Preparação de produtos para aumentar o contraste de várias estruturas em preparações destinadas ao exame ao microscópio óptico. O processo de farbing envolve processos químicos e físicos complexos, portanto, ao escolher um método, garanta a consistência seletiva das estruturas teciduais aos pássaros canoros com diferentes propriedades físicas e químicas.
As bérberis são divididas em básicas (basais), ácidas e especiais. As estruturas preparadas pelos principais bárbaros são chamadas basofílico, amoras azedas - oxifílico, acidófilo, eosinofílico.
As amoras principais (basais) contêm hematoxilina, que prepara os núcleos da cromatina e outras estruturas que contêm proteínas, azuis ou violetas; Carmim, que constitui o caroço das cerejas claras, safranina - cerejas escuras, tionina - azuis.
Das amoras ácidas, adiciona-se eosina (injeta citoplasma na erisipela), ácido pícrico (cor amarela), magenta (cor inicial), índigo carmim (cor azul).
Quando a microestrutura do queijo e dos produtos alimentícios é estudada, ela é mais frequentemente combinada com hematoxilina e eosina. Para tanto, transfira a hematoxilina da água por 1-3 minutos; 20-30 minutos enxágue com água, 3-5 minutos coloque eosina na boca e 3-5 minutos enxágue com água. A água perdida é retirada com papel filtro, aplica-se uma gota de álcool etílico 96% por 1 a 2 minutos e rega-se em solução de ácido carbólico 25% em xileno ou tolueno. Em seguida, aplique 1-2 gotas de bálsamo no corte e cubra com uma borda curva.
Para barvniki, que prepara inclusões gordurosas, geralmente vikorista Sudan 111. Para preparar alecrim barvnik em 95 cm 3 de álcool etílico 85%, adicione 5 cm 3 de acetona e despeje o pó Sudan III até que a rosa encharcada seja removida (barvniki também deve ser esfregado muito). A mistura é aquecida a 50% e filtrada. As amostras, colhidas em micrótomo congelado, são colocadas em álcool etílico a 50% por 1-2 minutos e depois no Sudão III por 25 minutos. Enxaguar os olhos com álcool 50%, enxaguar com água destilada e colocar em gelatina glicerinada.
Gotas de gordura neutra adquirem a cor laranja com o objetivo de decompor o Sudão III em gorduras. Inclusões gordurosas também podem ser detectadas com ácido ósmico e as estruturas gordurosas ficam pretas.
Vysnovok sob a encosta curva fazer no meio, para não deixar entrar o vento e guardar o corte por muito tempo. O líquido deve ser diluído com álcoois de potência crescente e colocado sob a superfície em jálico, bálsamo canadense ou gelatina de glicerina (o medicamento não deve aderir a álcoois ou xileno).
Preparação de preparações antes da microscopia eletrônica. Para investigar objetos biológicos, são utilizados dois tipos de microscópios eletrônicos: transmissão (transmissão) e varredura (raster).
O princípio de processamento de um objeto para exame em um microscópio eletrônico, que é translúcido, é baseado nos mesmos princípios dos microscópios ópticos: amostragem, fixação, lavagem, desidratação, vazamento, preparação ultraton que tipo de visualizações, contraste.
Seleção de amostra realizado com o objetivo de estudar a estrutura do material, seguindo as mesmas regras da microscopia óptica. O volume das tiras do material acabado não deve ultrapassar 1 mm3. O principal objetivo da metafixação é preservar o tecido yakmog o mais próximo possível de sua vida normal.
Fixação realizado para a melhor preservação das estruturas, é necessário congelar reagentes que afetam o pH e a isotonicidade, cujos valores são determinados pelo tipo de tecido que é fixado. O processo de fixação é realizado em duas etapas: prefixação e pós-fixação. Para prefixação, use glutaraldeído 2,5-3% (pH 7,2-7,4), o período de fixação é de 2 a 4 anos. A pós-fixação dura 2% (pH 7,2-7,4) - 1-2 anos. Para preservar a estrutura sobrevivente, recomenda-se a utilização de um fixador de baixa temperatura (0-4 °C) e preparar fixadores utilizando compostos de tampão fosfato, cacodilato e acetato de viro-nal.
Lavando realizado com álcool frio 30% de 5 a 7 vezes, porções de álcool na pele são aplicadas no objeto por 30 minutos e, em seguida. Esprema o fixador até que comece a ação oxidativa do fixador.
Znevodnennya realizar com álcoois etílicos de alta concentração: 30, 50, 70, 96, 100% por 30 minutos. Ao usar certos métodos de enchimento para irrigação, recomenda-se adicionar acetona e óxido de propileno.
Zalivannya ser realizado em resinas epóxi(araldit, epon ta in.). A polimerização das resinas em cápsulas é realizada em termostato a 60 ° C até o endurecimento, geralmente por um estiramento de 1-2 dB.
Olhos ultrafinos segure com a ajuda de facas de vidro em um ultramicrótomo, para o qual os blocos de epóxi são afiados no formato de uma pirâmide truncada de vários lados. As versões seriadas da cor cinza devem ser tomadas em banho com álcool etílico 10%. As seções recortadas são montadas sobre sedes de cobre ou paládio, em cuja superfície é aplicado primeiro o fundido do molde. Para identificar as estruturas necessárias, as partículas nas telas são tratadas com citrato de chumbo e acetato de uranila.
Para microscopia eletrônica de varreduraÉ necessário fixar os vestígios dos vestígios, mantê-los em bom estado de acordo com os vestígios dos vestígios e utilizá-los como fixadores. Após a rega, as flores são coladas no objeto trimach, as limas são colocadas na instalação e cobertas com a mais fina bola de ouro ou platina. Em vez da microscopia eletrônica, que é translúcida, podem ser usadas preparações corrosivas para digitalização: o objeto de tratamento é derramado com algum tipo de substância endurecedora e depois disso fica pegajoso e superficial. Existem também réplicas que seguem o caminho do congelamento - lascamento. Neste caso, deve-se observar o lascamento da superfície do objeto. Para aumentar o contraste, as réplicas devem ser feitas limando partículas metálicas (ouro, platina) ou vugila.
Controle a alimentação
