Histologinio tyrimo metodai. Šiuolaikinė histologija turi platų įvairių tyrimo metodų arsenalą. Visi šie metodai remiasi specialiu prietaisu – mikroskopu, todėl visi jie yra mikroskopiniai metodai.
Atidžiai pradėsiu tirti tiriamą objektą ir šie metodai bus skirstomi į gyvybinius (arba supravitalinius), jei dalyvauja gyvos ląstelės, audiniai, organai ir sveiki organizmai, ir po gyvybinius, jei tiriami negyvi fiksuoti ir objektai. .
Postvitalinio metodo, arba nuolatinio histologinio preparato ruošimo būdo, raida vyko lygiagrečiai su histologijos mokslo raida antroje XIX amžiaus pusėje. Tai dar vadinama klasikinės histologijos metodu. Šis metodas, vadinamas histologine arba mikroskopine technika, reikalauja pilno tyrimo objekto paruošimo. Tai lieka specialaus rašymo tema, kad pasiektų didelius įsipareigojusiuosius. Studentas, kuris pradeda studijuoti histologiją, turi susipažinti su pagrindiniais histologinių preparatų ruošimo būdais, kad geriau suprastų preparatus ir išmoktų analizuoti, „skaityti“ ir net naujausius histologinius mėginius. O vaistai plačiai naudojami tiek pradiniame procese ir moksliniuose tyrimuose.
Pirmasis vaisto paruošimo etapas yra medžiagos pašalinimas. Po šio etapo, kaip ir visų priepuolių, baigiasi paskutinis objekto sužalojimas. Todėl, pjaunant organą ar audinį, reikia naudoti aštrius peilius ir ašmenis, o audinio nespausti pincetu. Gabalai imami nedideliais dydžiais – apie 1 cm3 (daugiau nei 7x7x3 mm). Medžiaga turi būti šviežia ir turi būti paimta kuo greičiau po eksperimentinės būtybės mirties ar žmogaus mirties.
Kitas etapas yra medžiagos fiksavimas, kuris apima paimto dygsnio priveržimą ir kraštų tvirtinimą. Šio etapo tikslas – histologinių struktūrų ir makromolekulių konsolidavimas toje vietoje, kur kvapas buvo gyvame objekte. Visų pirma, fiksatoriai iki minimumo sumažina nusistovėjusių struktūrų pokyčius arba galite naudoti specialias fiksavimo priemones, kad šiuos pokyčius sumažintumėte iki minimumo. Fiksatoriai yra alkoholiai (etilas, metilas), formalino dariniai, svarbios metalų druskos ir rūgštys (oktova, pikrinas, osmis). Dažniausiai yra įvairių sulankstomų tvirtinimo maišelių, kuriuose yra įvairių junginių komponentų pavadinimai.
Trečias etapas yra fiksuotos medžiagos laistymas. Tam naudojami įvairios koncentracijos alkoholiai, kad jie palaipsniui padidėtų nuo 50-70 iki 100 laipsnių. Hidroizoliacija yra būtina kitame etape - sustiprintas objektas, esantis parafine, celiuliozėje ir sintetinėse dervose. Svarbu, kad dauguma šių dervų nesimaišytų su vandeniu, todėl norint, kad jos prasiskverbtų į medžiagą, reikia atsargiai pašalinti vandenį iš audinio, o po to pamirkyti ksilenu (toluenu, benzenu), arba derva, kuri gerai skaido parafiną, taip pat sumaišoma su 100 laipsnių etilo alkoholiu . Infiltravus objektą retuoju 55-5°C temperatūros parafinu, leidžiama kietėti kambario temperatūroje kartu su specialių formų parafinu. Taip valdomas parafino blokas. Ši procedūra vadinama užpildymu. Yra greitesnis būdas užšaldyti audinių likučius sausu ledu (anglies dioksidu) arba retas azotas, tirtų histologinių objektų struktūra išsaugoma skirtingu laiku.
Sutvirtinta medžiaga leidžia pagaminti plonas (5-7 µm storio), plonas (0,5-1 µm) pjūvis, kurios gali būti vikorizuojamos šviesos mikroskopijai ir ultraplonas vikorizuotas elektroninei mikroskopijai ir regėjimui (0,05-0,2 µm). Pjūviai ruošiami specialiais mikrotominiais prietaisais (šviesos mikroskopijai) ir ultramikrotominiais prietaisais (elektroninei mikroskopijai). Plonos, plonos arba itin plonos dalys yra aiškios šviesos mainams arba elektronų pluoštams su objektais ir leidžia juos ištirti naudojant aukštos kokybės mikroskopus. Norint išnarplioti objekto struktūrines detales, kurių dauguma neturi natūralių matmenų, būtina jas atskirti per paruošimo (vaizdavimui šviesos mikroskopu) arba kontrasto (elektroninės mikroskopijos) poreikį.
Histologija turi daugybę įvairių raugerškių paruošimo ir kompostavimo metodų, kurių reikia laikytis. Histologiškai raugerškiai skirstomi į laukines, laukines ir sintetines (anilinas). Raugintų uogų vaisiai – hematoksilinas, išgaunamas iš Centrinėje Amerikoje augančio rąstmedžio žievės, ir uoduose aptinkama medžiaga – šamas. Absoliuti dauguma raugerškių yra sintetinės – eozinas, fuksinas, žydras ir kt.
Svarbiausia yra histologinių raugerškių klasifikacija chemijos institucijos, todėl jame yra keletas terminų, kurie taps aiškesni. Todėl, chemijos autoritetų teigimu, histologinės raugerškiai skirstomi į rūgštines, bazines ir neutralias. Rūgščių raugerškių savybės klasifikuojamos pagal grupes -COOH, -HS03, H2P03, kurios vadinamos anijoninėmis raugerškėmis. Rūgščiosiose uogose yra celiulito citoplazma, jos vadinamos citoplazminėmis. Tokių uogų užpakalis gali būti eozino (suteikia ryškią rusvą spalvą), šviesiai žalias (suteikia žalia spalva). Histologinės struktūros, paruoštos naudojant rūgštines svirbenes, vadinamos oksifilinėmis (acidofilinėmis, eozinofilinėmis). Pavyzdžiui, tai yra eozinofilinių leukocitų citoplazminės granulės, kolageno skaidulos ir kt.
Pagrindiniai junginiai yra katijoniniai, svarbu tai, kad dauguma jų turi molekulę, kuri yra teigiamai įkrauta azoto atomais. Vardas barvnikovas selektyviai apvaisina ląstelių branduolius, todėl jie vadinami branduoliniais. Sudėtis gali būti hematoksilinas (mėlynai violetinė spalva), karminas (šviesiai raudonas), safraninas (tamsiai raudonas), žydras II (mėlynas). Histologinės struktūros, kurias formuoja pagrindiniai barniai, vadinamos bazofilinėmis. Tai bazofilinių leukocitų citoplazmoje esančios granulės, ląstelių branduoliai ir kt.
Neutralios raugerškio uogos įsikuria esant vandens veislių rūgščių ir bazinių raugerškių, pavyzdžiui, eozino rūgšties metileno mėlynojo. Be to, reikėtų atskirti neutralias raugerškes, jei tuo pačiu metu yra bazinių ir rūgščių raugerškių. Struktūros, kuriose yra ir bazinių, ir rūgščių raugerškių, vadinamos neutralaus profilio arba polichromatofilinėmis. Užpakalis gali būti neutroprofilio leukocitų granulės, polichromatofilinių eritroblastų citoplazma ir kt. Histologinių struktūrų buvimas, keičiantis pagrindinio barnio spalvą, žymimas terminu metachromazija. Bazofilinių leukocitų granuliuotumas, kremzlinio audinio tarpląstelinis audinys ir kt. yra metachromatiškai žievėtas. Viena iš dažniausiai vartojamų raugerškių yra hematoksilinas ir eozinas.
Yra specialūs rūgščių, bazinių ir neutralių raugerškių kremai, kuriais galima atpažinti dainuojančius balsus ar struktūras. Pavyzdžiui, Sudanas III prideda riebalinių audinių prie oranžinės spalvos, o orceinas prideda elastingų skaidulų į rudus.
Paruošti preparatai turi ištirpti alkoholiuose, tapti matomi ksilolyje, tada supilti ploną Kanados balzamo rutuliuką ir uždengti lenktu stiklu. Išdžiovinus balzamą, gausite nuolatinį vaistą, kurį galėsite vartoti ilgą laiką. Elektroninei mikroskopijai pjūviai imami ant ultramikrotomų, dedami ant specialių tinklelių, kontrastuojami su urano ar švino druskomis, apžiūrimi pro mikroskopą ir fotografuojami. Mikrofotografijos buvo pašalintos iš objekto ir kartu apdorotos histologiniais preparatais.
Be plonų pjūvių aprašymų, yra ir kitų tipų histologinių preparatų, kurie, ypač tam tikrais atvejais, yra žymiai retesni. Prieš juos – tepinėliai (kraujo, likvoro, gleivių ir kt.), tepinėliai (kepenų, užkrūčio liaukos, riebalinės membranos gleivinės), tepinėliai (turintys audinių, pleuros, smegenų membranos, trumparegystės), bendri preparatai (sėklos) ankstyvosios stadijos raida, artikuliacija).
Gyvybiniai (išgyvenimo) ląstelių ir audinių sekimo metodai leidžia gauti informacijos apie tuos, kuriems vyksta gyvybės procesai, dygsniuojasi apačia, apsiuva, augimas, sąveika tarp Tai mano reakcija į įvairius veiksnius. Nustatyti tyrimo metodai reikalingi papildyti šiuos duomenis, gautus klasikinės histologijos metodu apie žmogaus ląsteles ir audinius. Gyvi tyrimai atliekami gyvame organizme arba in vivo. Gyvoms ląstelėms stebėti vikoristiniai metodai naudojami gyvybiniam ir administraciniam gydymui. Tam naudojamos specialios, gyviems audiniams nenuodingos svirbelės. Gyvybinio apvaisinimo atveju raugerškis įvedamas į gyvo gyvūno organizmą ir selektyviai fermentuojamos celiuliozės ląstelės. Taigi, makrofagų sistemos ląstelės yra stebimos, ar nėra tripano mėlynojo arba ličio karmino. Supravitalinė fermentacija – tai iš organizmo išskirtų gyvų ląstelių fermentacija. Taip atsiskleidžia lizosomos (neutralus raudonas barvnikas), mitochondrijos (Janus green) ir kraujo retikulocitai (deimantiniai kreziliniai mėlyni).
Gyvybiniam ar intravitaliniam, taip pat ir povitaliniam neišsaugotų histologinių objektų tyrimui naudojama daugybė specialių šviesos mikroskopijos metodų – fazinis kontrastas, tamsus laukas, fluorescencija.
Fazių išplėtimo metodas užtikrina reikiamą kontrastą prieš stebint nesugertas struktūras už specialios žiedinės diafragmos, kuri telpa į kondensatorių, rėmo ir vadinamosios fazinės plokštės, kuri telpa į objektyvą. Tokia šviesos mikroskopo optikos konstrukcija leidžia pakeisti objektą prasiskverbiančios šviesos fazių pokyčius amplitudėje, kuri žymi akį kaip ryškumo pokytį.
Pagrindinis Tyrimo objektai Tai histologiniai preparatai, o pagrindinis tyrimo metodas – mikroskopija.
Histologinis mėginys gali atrodyti skaidrus (plonas) ir kontrastingas. Vynas ruošiamas tiek iš gyvų, tiek iš negyvų (fiksuotų) struktūrų. Vaistas gali būti naudojamas kaip audinių suspensija, tepinėlis, skystis, lydalas, visas preparatas ir plona dalis.
Histologinių preparatų ruošimo mikroskopiniam tyrimui procesas apima šiuos pagrindinius etapus: 1) medžiagos paėmimas ir jos fiksavimas; 2) sustiprinta medžiaga; 3) egzempliorių paruošimas; 4) vaizdų paruošimas ar kontrastavimas; 5) akių išdėstymas.
Paruošimui naudojamos specialios histologinės raugerškės, kurių pH vertės skiriasi: rūgštinės, neutralios ir šarminės. Jų apdorojamos struktūros, matyt, vadinamos oksifilinėmis, neutrofilinėmis (heterofilinėmis) ir bazofilinėmis.
Kokius metodus taiko histologijos mokslas? Kvapas yra daug ir įvairus:
Šviesos mikroskopija. Šiandieniniai mikroskopai gamina didelės raiškos duomenis. Atskyrimas apibrėžiamas kaip mažiausias atstumas (d) tarp dviejų gretimų taškų, kuriuos galima atskirti. Ši vertė turėtų būti ilgai išlaikoma šviesoje (λ) ir išreiškiama formule: d = 1/2 λ.
Mažiausia matomos dalies vertė yra 0,4 µm. Todėl maksimali šviesos mikroskopo galia tampa 0,2 mikrono, o maksimali talpa siekia 2500 kartų.
Ultravioletinė mikroskopija . Maksimali ultravioletinių spindulių vertė yra 0,2 mikrono, tačiau atskira ultravioletinio mikroskopo dalis yra 0,1 mikrono, o kadangi ultravioletinė spinduliuotė yra nematoma, būtina apsaugoti stebimą objektą Naujas liuminescencinis ekranas.
Fluorescencinė (liuminescencinė) mikroskopija. Trumposios bangos (nematoma) vibracija, kuri blėsta šalia upių, pažadina jų elektronus, kurie su didesne ilgojo nuotolio banga išnyksta į šviesą, likdami matomoje spektro dalyje. Tokiu būdu siekiama pažangos atskirose mikroskopo dalyse.
Fazinė kontrastinė mikroskopija Leidžia rodyti neišsaugotus objektus.
Poliarizacinė mikroskopija Tiriama histologinių struktūrų, pavyzdžiui, kolageno skaidulų, architektonikos raida.
Elektroninė mikroskopija suteikia galimybę susukti objektus, didėjant dešimtis tūkstančių kartų.
Mikrofotografija ir mikrokinas . Šie metodai leidžia užfiksuoti objektus nuotraukose ir gyvus mikroskopinius objektus Rusijoje.
Histo –ir citochemija , įskaitant kolkisną, leidžia aiškiai analizuoti šiuos objektus audinių, ląstelių ir tarpląsteliniame lygmenyse.
Citospektrofotometrija Tai leidžia megzti kilkinius vietoj šių ir kitų biologinių medžiagų austuose audiniuose ir molio spalvos šviesios spalvos balionėliuose su jais megztu svirniu.
Diferencinė centrifuga Leidžia atskirti ląsteles, kurios yra atskirtos viena nuo kitos savo mase.
Radiografija Jis pagrįstas radioaktyvaus žymeklio (pavyzdžiui, radioaktyvaus jodo, N-timidino ir kt.) įtraukimu į mainų procesą.
Morfometrija leidžia išmatuoti ląstelių, jų branduolių ir organų plotą ir tūrį naudojant papildomą mikrometrų ir specialių tinklelių okuliarą.
Zastosuvannya EOM automatiniam skaitmeninės medžiagos apdorojimui.
Audinių kultūros metodas Jis palaiko organizmo gyvybingumą ir ląstelių bei audinių struktūrą. Tam sukuriami specialūs konteineriai su gyvąja terpe, kuriuose sukuriamos visos ląstelių gyvybei reikalingos medžiagos. Taikant šį metodą galima ištirti ląstelių diferenciaciją ir funkcinį formavimąsi, jų piktybinės degeneracijos dėsningumus ir patinimo proceso raidą, tarpląstelinę sąveiką, ląstelių ir audinių lygį virusais ir kt. vaistiniai preparatai apie mainų procesus klientuose ir audiniuose ir kt.
Prizhitteve (vitalne) farbuvannya Jis naudojamas tiriant fagocitozės apraiškas ir makrofagų aktyvumą, neuronų kanalų filtravimą ir kt.
Audinių transplantacijos metodas. Šis metodas pagrįstas ląstelių elgsenos ir jų morfofunkcinės būklės pakeitimo metodu, kai jos persodinamos į kitą organizmą. Pavyzdžiui, šis metodas naudojamas gyvybei palaikyti būtybių, kurios yra pakankamai stiprios, kad gautų mirtiną dozę.
Mikromanipuliacija.Šis metodas pagrįstas molekuline biologija, genų inžinerija, taip pat klonavimo metu, kai naudojant mikromanipuliatorių pašalinamas kiaušialąstės branduolys su haploidiniu chromosomų rinkiniu ir į jį persodinamas somatinės ląstelės branduolys. diploidinis chromosomų rinkinys.
Histologijos dalykas. Histologinių tyrimų metodai. Klitino teorija.
ĮVADAS Į HISTOLOGIJĄ. BUDOVA KLITINI.
1 paskaita
Histologija– tai mokslas apie gyvybę, materijos audinių vystymąsi ir gyvybingumą. Audiniai audžiami iš gyvų ir negyvų kūnų. Histologinių objektų ir jų subtilių struktūrų tyrimas atliekamas mikroskopų pagalba, kurie šimtus tūkstančių kartų padidina plika akimi nematomas detales.
Histologijos kursas protingai suskirstytas į šiuos skyrius:
1. Citologija yra mokslas apie ląsteles.
2. Embriologija – mokslas apie vystymąsi nuo gimimo iki galutinio kūno susiformavimo.
3. Slaptoji histologija yra mokslas apie slaptus audinius valdančius modelius.
4. Privati histologija – mokslas apie Budovą, organų ir sistemų raidą.
Pagrindiniai histologijos, kaip dalyko, uždaviniai – įgyti žinių apie sveiko kūno mikroskopinius ir ultramikroskopinius audinius, organų audinius ir sistemas bei neurologinį ryšį su jų raida ir nusistovėjusiomis funkcijomis.
Pagrindiniai histologinio tyrimo metodai yra mikroskopija ir specialūs (nemikroskopiniai) metodai (histochemija, citofotometrija, autoradiografija ir kt.).
Tyrimo objektai gali būti gyvos arba negyvos (fiksuotos) ląstelės ir audiniai.
Ląstelėms ir audiniams ištirti mikroskopu ruošiami histologiniai preparatai.
Pagrindiniai histologinių objektų tyrimo metodai yra šviesos mikroskopija ir elektroninė mikroskopija, plačiai naudojami klinikinėje ir eksperimentinėje praktikoje.
Šviesos optiniai mikroskopai. Pagrindinė optinė mikroskopo dalis yra sulankstyta į objektyvą ir okuliarą. Objektyvas turi patikimiausią optinę sistemą, kuri suteikia didesnį objekto vaizdą. Okuliaras yra optinė sistema, kuri tarnauja kaip didinamasis stiklas, vizualiai užfiksuojant didesnį objekto vaizdą, kurį suteikia objektyvas. Okuliaras sukuria didesnius vaizdus 5-25 kartus.
Taigi svarbiausios mikroskopo savybės yra jo efektyvumas ir padidinimas. Atskyrimas – minimalus atstumas tarp dviejų objekto taškų, kaip matyti iš išorės. Mikroskopo padidinimas – tai reikšmė, parodanti, kiek kartų mikroskopo optinės sistemos suformuoto vaizdo linijiniai matmenys yra didesni už objekto linijinius matmenis. Didesnis mikroskopas gaunamas iš didesnio lęšio ir okuliaro, o jų kiekis padidėja. Šiuolaikiniai optiniai mikroskopai veikia iki 1500 kartų.
Elektroninė mikroskopija Elektroniniai mikroskopai turi didelę įvairovę. Kitaip tariant, elektroniniame mikroskope teoriškai įmanoma sustiprinti atskirus duomenis ir, matyt, padidinti vaizdą 150 000 kartų daugiau nei vienodo šviesos mikroskopo. Dažniausiai morfologiniams tyrimams naudojami elektroniniai mikroskopai, leidžiantys išmatuoti tiriamo objekto vaizdo plotą. Ateityje rastriniai (skenavimo) elektroniniai mikroskopai bus aktyviai naudojami kuriant trivialius vaizdus, kad būtų galima gauti daugiau galimybių vaizdinėms struktūroms.
Histologinių ir citologinių preparatų mikrostruktūrų kiekybinio tyrimo metodai. Kruopštus mikrostruktūrų įvertinimas yra būtinas objektyvių duomenų apie jų būklę identifikavimas normaliomis sąlygomis, atliekant eksperimentinius tyrimus ir patologiją. Pagrindiniai mikrostruktūrų rodikliai yra morfometriniai (struktūrų skaičius ir jų geometriniai parametrai) ir densitometriniai, atspindintys koncentraciją (optinę galią) cheminės kalbos mikrostruktūrose. Šiems parametrams nustatyti naudojami morfometriniai ir spektrofotometriniai metodai bei automatizuotos vaizdo apdorojimo sistemos.
Organizmo skenavimui audinių ir ląstelių lygmeniu reikia paruošti histologinius preparatus ir ištirti juos mikroskopu. Histologinio preparato paruošimo būdas yra paruošti medžiagą tyrimui mikroskopu, kad būtų gautas aiškumas ir kontrastas.
Dažnai veiksmingiausias yra medžiagos pritaikymas naujai išvaizdai (pavyzdžiui, pasirūpinti migruojančio epitelio darbu). Norėdami paruošti preparatą, paimkite švarų daiktą. Į vidurį įlašinkite vandens arba fiziologinio tirpalo lašelį, įvyniokite į jį audinio pavyzdžius, kad būtų lengviau matyti, ir, valdydami mikroskopu, išlyginkite juos išpjaustymo galvutėmis.
Kad paruošimas būtų kontrastingesnis ir sumažintų galimybę gerai atskirti jo detales, objektas yra paruošiamas. Kartu verta paminėti, kad skirtingos audinių ir ląstelių struktūros skirtingai reaguoja viena į kitą.
Nuolatinių preparatų paruošimas gali užtrukti daug laiko, o tokius preparatus galima apdoroti ilgą laiką. Preparatai ruošiami iš mažų vientisų objektų (visų preparatų) arba sekcijų; Visiems protams objektas per objektyvą yra subtilus ir įžvalgus, kitaip jo neįmanoma apžiūrėti pro mikroskopą.
Vaisto paruošimas susideda iš kelių etapų.
2. Histologinio tyrimo objektai
3. Histologinių preparatų ruošimas
4. Tyrimo metodai
5. Histologijos raidos istoriniai etapai
1. Histologija mokslas apie mikroskopinę ir submikroskopinę gyvybę, gyvų organizmų audinių vystymąsi ir gyvybingumą. Be to, histologija yra vienas iš pagrindinių gyvųjų audinių organizavimo aspektų. Šie yra atskirti Hierarchiniai lygūs gyvosios medžiagos organizavimas:
klintis;
tekstilė;
organų struktūriniai ir funkciniai vienetai;
organų rabarbarai;
sistemos rabarbarai;
ekologiški rabarbarai
Histologija kaip pradinė disciplina, apima šiuos skyrius: citologija, embriologija, išorinė histologija (susijusi su biologinėmis audinių funkcijomis), privati histologija (susijusi su mikroskopiniu organų tyrimu).
Pagrindinis objektas Histologijos studijos yra sveiko žmogaus kūnas, todėl pradinė disciplina vadinama žmogaus histologija.
Pagrindinė užduotis Histologija apima pažeistas ląsteles, audinius, organus, raiščių tarp įvairių objektų užmezgimą, paslėptų raštų nustatymą.
Histologija, kaip ir anatomija, apima morfologijos mokslus, galvos suktukaiįvairios gyvųjų sistemų struktūrų modifikacijos. Vietoj anatomijos histologija tiria gyvąją medžiagą mikroskopiniu ir elektroniniu mikroskopiniu lygmenimis. Tokiu atveju šiuo metu bus atliekami įvairių konstrukcinių elementų modifikacijos pagal jiems priskirtas funkcijas. Toks požiūris į gyvosios medžiagos struktūrų implantavimą vadinamas histofiziologiniu, o histologija dažnai vadinama histofiziologija. Be to, kai gyva medžiaga implantuojama į ląstelių, audinių ir organų lygmenis, matoma ne tik struktūrų forma, dydis ir pasiskirstymas, bet ir citochemijos bei histochemijos metodais dažnai nustatoma audinio sudėtis. kurios sukuria šias struktūras. Besivystančios struktūros turi būti tiriamos atsižvelgiant į jų vystymąsi tiek intrauteriniu (embrioniniu) laikotarpiu, tiek per visą postembrioninę ontogenezę. Tai taip pat paaiškina poreikį įtraukti embriologiją prieš histologijos kursą.
Histologija, kaip mokslas, turi savo objektai ir metodai Viskas. Dažniausiai skiepijimui naudojami audiniai, audinių ir organų fragmentai, specialiai paruošti skiepijimui mikroskopu.
2. Tyrimo objektai skirstomi į:
gyvas (klinai kraujo lašeliuose, klitinai kultūroje ir kt.);
negyvi arba fiksuoti, kuriuos galima paimti iš gyvo organizmo (biopsija) arba iš lavonų.
Bet kokiu atveju, paėmus popieriaus gabalus, smarvė pasiduoda bet kokioms taisymo problemoms ar sušalimui. Moksliniais ir pagrindiniais tikslais naudojami fiksuoti objektai. Taip paruošti, o vėliau tirti mikroskopu išanalizuoti preparatai vadinami histologiniais preparatais.
Histologinis mėginys Jūs galite pamatyti:
plonas, baruotas organo audinys;
tepinėlis ant odos;
poveikis pažeisto organo odai;
plonas spjaudymo preparatas.
Bet kokios formos histologinis preparatas sukelia šiuos padarinius:
išsaugoti konstrukcijų gyvybę;
Būtinai būkite plonas ir aiškus, kad jį apžiūrėtumėte mikroskopu pro praeinančią šviesą;
Jei jis kontrastingas, tai po mikroskopu aiškiai matomos besikeičiančios struktūros;
Šviesos mikroskopijos preparatai turi būti saugomi ir naudojami pakartotinai ilgą laiką.
Juos galima pasiekti per valandą po vaisto paruošimo.
3. Žiūrėkite tai histologinio preparato ruošimo etapai
Paimkite medžiagą(audinio ar organo gabalėlis) vaistui paruošti. Tokiu atveju medžiaga turi būti renkama prieš gyvūno mirtį ar mirtį, o jei įmanoma, gyvo objekto pavidalu (biopsija), kad būtų geriau išsaugotos kūno, audinių ar organo struktūros. ; Siuvinėjimas turi būti iškirptas naudojant standartinį įrankį, kad nepažeistumėte audinio; Prekės audinio nereikia per daug pailginti 5 mm, kad tvirtinimo žymė galėtų prasiskverbti į prekės audinį; Daiktai turi būti pažymėti (kūno pavadinimas, būtybės numeris arba asmens slapyvardis, paėmimo data ir kt.)
Medžiagos tvirtinimas būtini medžiagų apykaitos procesams paspartinti ir struktūroms apsaugoti nuo irimo. Fiksacija dažniausiai pasiekiama naudojant popieriaus pleištą fiksavimo terpėje, kuri gali būti paprasti alkoholiai ir formalinas bei Carnoy lankstymo priemonės, Zinkerio fiksatorius ir kt. Fiksatorius sukelia baltymų denatūravimą ir taip pagreitina medžiagų apykaitos procesus bei išsaugo struktūras pradinėje būsenoje. Fiksuoti galima ir užšaldant (aušinant CO2, retuoju azotu ir pan.). Fiksacijos sunkumą lemia paskutinis odos audinio ar organo sluoksnis.
Drabužių pildymas prie tarpeklio vidurio(parafinas, visas, dervos) arba užšaldymas tolesniam plonų pjūvių paruošimui.
Riekelių ruošimas ant specialių įrankių (mikrotomija arba ultramikrotomija) specialių peilių pagalba. Šviesos mikroskopijai skirti griežinėliai klijuojami ant stiklelio, o elektroninei mikroskopijai montuojami ant specialių tinklelių.
Zabarvlennya zrіziv arba nėra kontrasto (elektronų mikroskopijai). Prieš užkertant kelią pjūviams, sustorėjęs vidurys pašalinamas (deparafinavimas). Statinės pasiekia šių struktūrų kontrastą. Raugerškiai skirstomi į bazines, rūgštines ir neutralias. Plačiausiai naudojamos bazinės raugerškės (vadinamos hematoksilinu) ir rūgštys (eozinas). Sulankstomos baravytės dažnai auga vikoristiškai.
Akių nušvitimas(ksilene, toluene), dedamas į dervą (balzamas, polistirenas), uždengtas lenktu stiklu.
Po šių nuoseklių procedūrų preparatą galima ištirti šviesos mikroskopu.
Elektroninės mikroskopijos tikslams preparatų ruošimo etapuose yra ypatumų arba pačių pagrindinių principų. Pagrindinis rūpestis yra tas, kad histologinis preparatas šviesos mikroskopijai gali būti išsaugotas labai sunkiai ir neužterštas. Elektroninei mikroskopijai skirti griežinėliai yra vienkartiniai. Paruošus pirmąjį objektą, būtina išskirti, fotografuoti, atliekama konstrukcijų implantacija naudojant elektronogramas.
Iš retos konsistencijos audinių(Kraujas, likvoras ir kt.) preparatai ruošiami nuo ant stiklelio atsiradusio tepinėlio, kurie taip pat fiksuojami, paruošiami, o vėliau tiriami.
Zi trapūs parenchiminiai organai(kepenų, nirkos ir kt.) organo išvaizdai ruošiami preparatai: lūžus ar plyšus ant lūžusio organo uždedamas daiktas, ant kurio klijuojami audinio lipdukai. Tada vaistas fiksuojamas, paruošiamas ir vartojamas.
Zrestha, iš aktyvių kūnų(brezas, smegenų membranos minkštimas) arba iš puraus pluoštinio kompozitinio audinio, flotacijos preparatai ruošiami tempiant arba susmulkinant tarp dviejų stiklinių, taip pat su žingsniniu fiksavimu, žievėjimu ir pilant dervą.
4. Pagrindinis tyrimo metodas biologiniai objektai, kurie analizuojami histologijoje mikroskopo vonia, Tai yra histologinių preparatų tyrimas mikroskopu. Mikroskopija gali būti savarankiškas gydymo metodas, bet kitu atveju galite naudoti kitus metodus (histochemiją, historadiografiją ir kt.). Verta prisiminti, kad mikroskopijai naudojami skirtingo dizaino mikroskopai, leidžiantys nuskaityti skirtingus matuojamų objektų parametrus. Šie yra atskirti Mikroskopijos tipai:
šviesos mikroskopija (atskiras dydis 0,2 µm) yra pažangiausias mikroskopijos tipas;
ultravioletinė mikroskopija (atskiras dydis 0,1 mikrono);
liuminescencinė (fluorescencinė) mikroskopija, skirta cheminėms medžiagoms identifikuoti matomose struktūrose;
fazinio kontrasto mikroskopija, skirta struktūroms implantuoti nekonservuotuose histologiniuose preparatuose;
poliarizacinė mikroskopija implantacijai, galvos rangas, pluoštinės struktūros;
tamsaus lauko mikroskopija gyviems objektams vaizduoti;
Krintančios šviesos mikroskopija kietiems objektams tirti;
elektroninė mikroskopija (atskiras diapazonas iki 0,1-0,7 nm), dviejų tipų permatoma (perdavimo) elektroninė mikroskopija ir skenuojanti arba rastrinė mikroskopija suteikia ultra struktūrų paviršiaus vaizdus.
Histocheminiai ir citocheminiai metodai leidžia nustatyti cheminių medžiagų laikymą ir nustatyti jų stiprumą apdorojamose konstrukcijose. Metodas pagrįstas cheminėmis reakcijomis, atliekamomis su reagentu ir substrate esančiomis cheminėmis medžiagomis, su sukurtu reakcijos produktu (kontrastiniu arba fluorescenciniu), kuris vėliau aptinkamas šviesoje arba liuminescencijoje be mikroskopijos.
Histoautoradiografijos metodas leidžia nustatyti cheminių medžiagų saugojimą struktūrose ir keitimosi radioaktyviųjų izotopų įtraukimu intensyvumą, kad būtų galima atsekti struktūras. Šis metodas dažniausiai naudojamas eksperimentams su gyvūnais.
Diferencialinis centrifugavimo metodas leidžia susukti aplink organelius ir siūlų fragmentus, matomus iš audinio. Šiuo tikslu audinį sumalkite iki organo, užpildykite fiziologiniu tirpalu, o tada sukite centrifugoje su skirtingais įvyniojimais (nuo 2 iki 150 tūkst.) ir atskirkite surinktas frakcijas, kurios vėliau susukamos skirtingais būdais.
Interferometrijos metodas leidžia nustatyti sausą kalbos masę gyvuose ir fiksuotuose objektuose.
Imunomorfologiniai metodai leidžia be išankstinių imuninių reakcijų atlikimo, remiantis antigeno ir antikūnų sąveika, identifikuoti limfocitų subpopuliacijas, nustatyti ląstelių svetimumo stadiją, atlikti audinių organų histologinį tipavimą (ty histosuicity). organų transplantacija.
Klitino kultūros metodas(in vitro, in vivo) ląstelių aptikimas mėginiuose arba specialiose kūno kapsulėse ir tolesnis gyvų ląstelių tyrimas mikroskopu.
Yra tik kelios rūšys, kurios tiriamos histologijoje
Norint vizualizuoti struktūras šviesos mikroskopu, svarbūs mikrometrai: 1 µm tampa 0,001 mm; elektroninėje mikroskopijoje keisti nanometrus: 1 nm tampa 0,001 mikrono.
5. U histologijos raidos istorija psichiškai pamatyti tris laikotarpis:
Ikimikroskopinis laikotarpis(nuo IV a. pr. Kr. iki 1665 m.) siejamas su Aristotelio, Galeno, Avicenos, Vesalijaus, Falopijos vardais ir pasižymi įvairialyčių audinių (kietų, minkštų, retų ir kt.) įžvelgimo gyvūnų ir žmonių kūne bandymais. ir geriausi anatominio skrodimo metodai
Mikroskopinis laikotarpis(Z 1665 iki 1950). Laikotarpio pradžia siejama su anglų fiziko Roberto Huko, kuris visų pirma tobulino mikroskopą (prisiminkime, kad pirmieji mikroskopai buvo rasti XVII a. pradžioje), pavardėmis, kitaip tariant, padėjusio. jam už sistemingus tyrimus iš jų, iš to biologinių objektų skaičiaus ir šių tyrimų rezultatų paskelbimą 1665 rubliais. Knygoje „Mikrografija“ III, pirmame amžiuje, buvo pradėtas vartoti terminas „klitina“ („celiuliukas“). Toliau buvo tobulinami mikroskopai ir jų biologiniai audiniai bei organai.
Ypatinga pagarba buvo skirta Budovos vynuogynui. Jan Purkinje aprašė „protoplazmos“ (citoplazmos) ir branduolių buvimą būtybių ląstelėse, o vėliau R. Brownas patvirtino branduolių ir ląstelių buvimą daugumoje būtybių. Botanikui M. Schleidenui įstrigo ląstelių su citokeneze veikla. Šių tyrimų rezultatai leido T. Schwanui, remiantis jų turima informacija, suformuluoti Klinto teoriją (1838-1839) trimis postulatais:
visi augantys ir sukurti organizmai susideda iš ląstelių;
visos ląstelės vystosi pagal pagrindinį principą iš citoblastomų;
Odos ląstelė turi savarankišką gyvybingumą, o kūno gyvybingumas yra ląstelių veiklos suma.
Tačiau R. Virchovas (g. 1858 m.) nepaaiškino, kad ląstelių vystymuisi įtakos turi kelias po išeinamąja ląstele (ar ląstelė yra iš ląstelės). T. Schwano sukurti principai, klimato teorija, aktualūs ir šiandien, nors suformuluoti skirtingai.
Dabartinės ląstelių teorijos nuostatos:
ląstelė yra mažiausias gyvų daiktų vienetas;
būtybių ir organizmų ląstelės, panašios į jų namų ūkį;
Ląstelių dauginimąsi generuoja kelias po išėjimo ląstele;
Daugialąsčiai organizmai yra sudėtingi ląstelių ir panašių organizmų ansambliai, sujungti į audinių ir organų sistemas, tarpusavyje sujungti ląstelinėmis, humoralinėmis ir nervinėmis reguliavimo formomis.
Tolesnis mikroskopų tobulinimas, ypač achromatinių lęšių naudojimas, leido nustatyti skirtingas ląstelių struktūras:
Hertwig klinikinis centras, 1875 m.;
kietųjų dalelių aparatas arba plokščių dalinis kompleksas Golgi, 1898 m.;
Bendo mitochondrijos, 1898 m
Dabartinis etapas Histologijos raida prasidėjo 1950 m. Nuo elektroninio mikroskopo atradimo pradžios, biologinių objektų implantavimo, nors elektroninis mikroskopas buvo rastas anksčiau (E. Ruska, M. Knoll, 1931). Tačiau dabartiniam histologijos raidos etapui būdingas ne tik elektroninio mikroskopo, bet ir kitų metodų naudojimas: citocheminė histochemija, historadiografija ir kiti persistengti metodai. Šiuo atveju naudojamas įvairių metodų kompleksas, leidžiantis ne tik aiškiai nurodyti paveiktas struktūras, bet ir nustatyti tikslias charakteristikas. Ypač plačiai naudojami įvairūs morfometriniai metodai, pagrįsti automatizuotomis sistemomis, skirtomis užfiksuotai informacijai apdoroti naudojant kompiuterius.
2 paskaita. Citologija. Citoplazma
Tyrimo objektai gali būti fiksuotos (negyvos) arba gyvos ląstelės ir audiniai.
Sūrių ir maisto produktų mikrostruktūrai tirti paprastai naudojama fiksuotų audinių ir audinių vikoristika. Vaistai yra arba momentiniai, skirti vienkartinei injekcijai, arba nuolatiniai, kuriuos galima išsaugoti ir plačiai stebėti. Be to, naudojami visi ir pilni preparatai.
Laiku ruošiamasi Galite paruošti plokščią shvidko; Šiuo tikslu medžiaga fiksuojama ir pjūviai daromi ant mikrotomo, kuris yra užšaldomas; jei yra, skalpeliu arba peiliuku galima padaryti ploną audinio ar organo atkarpą. Nulupkite supjaustytas dalis, padėkite ant stiklinės stiklelio, tada užlašinkite lašą glicerino ir uždenkite lenktu stiklu. Krakmolui identifikuoti ištirpinkite jodą kalio jodide: 0,5 g kalio jodido ištirpinkite nedideliame kiekyje vandens, įpilkite 1 g kristalinio jodido ir įpilkite vandens iki 100 cm 3 . Pabarstykite reagentu ant plono ešerių gabalėlio, miltelių ar kitos medžiagos, paskleiskite ant stiklelio, ir krakmolas taps mėlynai violetine spalva.
Visiškas arba visiškas paruošimas pėdsakų nepašalinant organo audinio. Pavyzdžiui, tarp objekto ir lenkto stiklo reikia įdėti išsiliejusią poodinę celiuliozę arba susmulkintą šaknies šaknies preparatą po fiksavimo, plovimo ir paruošimo. Norėdami atpažinti kitus fiksuotus ir fermentuotus dubens ląstelių gabalėlių ar lygaus mėsos audinio struktūrinius elementus, nupeškite plika oda ant stiklelio – tokie preparatai vadinami gnybimu. Daugeliu atvejų, pavyzdžiui, pritvirtinę ir nuplovę žievę, mišinio neišimkite, nes ląstelėse yra organinių inkliuzų (pigmento), kurie išsipučia, kai sugadinami giminaičiai.
Histologinio mėginio paruošimo metodai Pagrindinis fiksuotų ląstelių ir audinių skiepijimo būdas yra histologinis. apkalto audinio tyrimas, patalpintas specialiame centre. Norėdami nupjauti pjūvius, supilkite gatavą medžiagą į parafiną arba visą medžiagą, kuri leidžia išpjauti plonus pjūvius (5-7 µm arba 10-30 µm horizontaliai), kad sklandžiai paruoštumėte pjūvius (40-60 mikronų), naudokite techniką. kad sustings.
Pagrindiniai histologinio preparato ruošimo etapai: mėginių ėmimas, fiksavimas, plovimas, laistymas, pilimas iki parafino arba vientiso, paruošimas, klojimas po lenktu paviršiumi.
Mėginio pasirinkimas atliekami siekiant užtikrinti tinkamą medžiagos tyrimą ir struktūrą. Mėginio dydis vidutiniškai neturi viršyti 2,5-3,0 cm.Iš kapsulės imami kepenų ir blužnies mėginiai. Iš širdies pašalinami priekinės širdies fragmentai, plonesni membranos fragmentai, ant vieno preparato galima nustatyti epikardo, miokardo ir endokardo topografinę išvaizdą. Iš apačios, limfmazgių ir virš nervinių liaukų, brėžiami organų pjūviai taip, kad kampas būtų statmenas paviršiui, kad preparate būtų matomos gimdos kaklelio ir smegenų venos. Jei reikia ruošti organų keitimo preparatus, atsekamos medžiagos atraižos perpjaunamos ties kordonu su pažeista vieta, kad mėginys netektų ertmės perėjimo zoną. Skeleto raumenų mėginiai turi būti supjaustyti taip, kad mėsos pluoštai būtų vėlesnėje ir skersinėje dalyje. Iš pradžių sijojamus faršo, serbentų ir kitų ingredientų pavyzdžius uždėkite ant marlės gabalėlio ir suriškite siūlu. Svarbu įsidėmėti, kad krūtinės ertmei augant, kojos krenta dėl elastingumo, o tai reiškia, kad jos praranda lengvumą, tada į kvėpavimo organų trachėją įkišama stiklinė ar humuso vamzdelis ir palaipsniui per ją suleidžiama. . Ant trachėjos po įkištu vamzdeliu užtepkite siūlų raištį ir suriškite siūlą, kad visiškai uždarytumėte. Norėdami pritvirtinti žarnyną, pirmiausia suriškite pjūvį su raiščiais iš abiejų pusių prie organo, skirto fiksuoti. Mėginiai antspauduojami etiketėmis iš storo popieriaus, pažymėtomis mėginio atrinkimo numeriu ir data.
Fiksavimas, tobto. gamtos (gyvosios) architektonikos taupymas, kuris atliekamas siekiant gyvąją konstrukcijų protoplazmą perkelti į nekintamą būseną. Fiksatorių poveikis pasireiškia tuo, kad audiniuose ir organuose dėl biofizinių procesų vyksta negrįžtamas baltymų krešėjimas. Paimant audinį iš organo, geriausia jį užfiksuoti fiksatoriuje; Medžiagos ir tvirtinimo santykio santykis yra ne mažesnis kaip 1:9 (3 pav.).
Fiksacija lemia tam tikrą saviraiškos pareigos sustiprėjimą ir pasikeitimą. Dažniausiai fiksavimui naudojamas 10-12% formaldehidas, etilo alkoholis ir acetonas. Norint paruošti nurodytos koncentracijos fiksavimo priemonę, 40% formaldehido skiedžiamas vandeniu iš čiaupo. Tokiais atvejais naudojamas etilo alkoholis (100 % absoliutus arba 96 %), jei reikia nustatyti medžiagas, kurios yra ištirpusios vandens fiksatoriuose (pavyzdžiui, glikogenas). Tyrimo medžiaga (pavyzdžiui, smegenys) fiksuojama acetone ilgiau nei kelerius metus. Jei pažeistas organas, pvz., cistinis audinys, turi būti pašalintas, atliekamas kalkių pašalinimas arba uždegimas. Norėdami tai padaryti, nuleiskite nedidelį šepetėlio gabalėlį (arba pakabinkite jį ant sriegio) 5–8% vandens tirpale. azoto rūgštis, kuris keičiamas 2-3 kartus po gabalėlį.. Apie nukalkinimo rezultatą galima spręsti į šepetėlį įkišus ploną galvutę: jei nėra atramos, nukalkinimas baigiamas. Po tokio pro-
Skalbimas atliekama siekiant pašalinti įsisenėjusią fiksatoriaus dalį, pavyzdžiui, po fiksacijos formalinu, skalavimas atliekamas tekančiu vandeniu iš čiaupo.
Znevodnennya kietinti medžiagą etilo alkoholyje, kurio pradinė koncentracija: 50-70-100. Norėdami paruošti 50% ir 70% alkoholį, praskieskite 96% spiritą distiliuotu vandeniu. Norint paruošti 100% alkoholį, vario sulfatą reikia kepti iki visiško laistymo ir į baltus miltelius įpilti 96% etilo alkoholio. Esant odos alkoholio koncentracijai, medžiaga išsilaiko 1-24 metus priklausomai nuo audinio, organo dydžio; Su 70% alkoholio medžiaga gali būti apipjaustyta ištempus keletą dyglių.
Zalivannya būti atliekama taip, kad akių stebėjimas taptų sunkus, o tai leidžia išlaikyti plonus vaizdus. Šiam tikslui naudokite parafiną (perkoliacijos laikotarpis 1-4 metai), visą medžiagą (pralaidumo laikotarpis 3 metai). Jei aptinkama riebalų, tada, norėdami atsekti pūkuotus audinius ir organus, supilkite želatiną.
Regėjimas naudokite roges arba rotacinius mikrotomus. Ploniausias dalis (5-7 mikronai) galima paruošti iš medžiagos, įterptos į parafiną. Medžiaga, užpildyta solidinu, paruošiama 15-20 mikronų storio. Sūrio ir maisto produktų mikrostruktūrai tirti, kaip taisyklė, naudokite užšaldymo technologiją. Tai pagreitina vaisto paruošimą, o trys laistymo ir užtvindymo etapai išjungiami. Po fiksavimo ir plovimo objekto audiniai dedami ant minkštos mikrotominės scenos, kuri užšaldoma ir supjaustoma 40-60 µm storio pjūviais. Taikikliai nunešami su penzliku į vandenį, o smarvė ištiesinama, patinsta, kai atsiranda ploniausių pilkų krešulių.
Produktų paruošimas padidinti įvairių struktūrų kontrastą preparatuose, skirtuose tirti šviesos mikroskopu. Farbing procesas apima sudėtingus cheminius ir fizinius procesus, todėl renkantis metodą, pasirūpinkite, kad skirtingų fizikinių ir cheminių savybių paukščiams giesmininkams būtų selektyvus audinių struktūrų nuoseklumas.
Raugerškiai skirstomi į pagrindines (bazines), rūgštąsias ir specialiąsias. Struktūros, kurias ruošia pagrindiniai barbarai, vadinamos bazofilinis, rūgščios braškės - oksifilinis, acidofilinis, eozinofilinis.
Pagrindinėse (bazinėse) uogose yra hematoksilino, kuris paruošia chromatino branduolius ir kitas struktūras, kuriose yra baltymų, mėlynos arba violetinės spalvos; Karminas, sudarantis šviesiųjų vyšnių branduolį, safraninas – tamsiosios vyšnios, tioninas – mėlynas.
Iš rūgščių svirblinių uogų dedama eozino (suleidžia citoplazmą į erškėtrožes), pikrino rūgšties (geltonos spalvos), purpurinės (ankstyvos spalvos), indigokarmino (mėlynos spalvos).
Ištyrus sūrio ir maisto produktų mikrostruktūrą, jis dažniausiai derinamas su hematoksilinu ir eozinu. Šiuo tikslu perkelkite hematoksiliną iš vandens 1-3 minutes; 20-30 minučių nuplaukite vandeniu, 3-5 minutes įdėkite eozino į burną ir 3-5 minutes nuplaukite vandeniu. Prarandamas vanduo pašalinamas filtravimo popieriumi, 1-2 minutes užlašinamas lašas 96% etilo alkoholio ir laistomas 25% karbolio rūgšties tirpalu ksilene arba toluene. Tada ant pjūvio užlašinkite 1-2 lašus balzamo ir uždenkite lenktu kraštu.
Barvnikams, kurie ruošia riebalinius inkliuzus, dažnai vikorista Sudan 111. Norėdami paruošti barvnik rozmariną 95 cm 3 85% etilo alkoholio, įpilkite 5 cm 3 acetono ir supilkite Sudan III miltelius, kol išmirkusi rožė bus pašalinta (barvnikus taip pat reikia ištrinti daug). Mišinys pašildomas iki 50% ir filtruojamas. Mėginiai, paimti ant užšaldyto mikrotomo, 1–2 minutėms dedami į 50 % etilo alkoholį, o po to 25 minutėms į Sudano III tirpalą. Išskalaukite akis 50% alkoholiu, nuplaukite distiliuotu vandeniu ir padėkite į gliceriną-želatiną.
Neutralių riebalų lašai paverčiami oranžine spalva, kad riebaluose būtų suskaidytas Sudan III. Riebalų inkliuzus galima aptikti ir naudojant osminę rūgštį, o riebalinės struktūros pajuoduoja.
Vysnovok po lenktu šlaitu atlikite ties viduriu, kad neįsileistumėte vėjo ir ilgą laiką išsaugotumėte pjūvį. Skystis turi būti skiedžiamas stiprėjančio stiprumo alkoholiais ir po paviršiumi dedamas į jalic, Kanados balzamą arba gliceriną-želatiną (vaistas neturi sulipti su alkoholiais ar ksilenu).
Preparatų ruošimas prieš elektroninę mikroskopiją. Biologiniams objektams tirti naudojami dviejų tipų elektroniniai mikroskopai: perdavimo (perdavimo) ir skenavimo (rastrinis).
Objekto apdirbimo tirti elektroniniu mikroskopu, kuris yra permatomas, principas grindžiamas tais pačiais principais kaip ir optiniuose mikroskopuose: mėginių ėmimas, fiksavimas, plovimas, nusausinimas, išpylimas, ultratono paruošimas kokie vaizdai, kontrastavimas.
Mėginio pasirinkimas atliekama siekiant ištirti medžiagos struktūrą, laikantis tų pačių taisyklių kaip ir atliekant šviesos mikroskopiją. Gatavos medžiagos juostelių tūris neturi viršyti 1 mm3. Pagrindinis metafiksacijos tikslas – išsaugoti jakmoginį audinį kuo arčiau jo normalaus gyvenimo.
Fiksavimas Siekiant geriausio struktūrų išsaugojimo, būtina užšaldyti pH ir izotoniškumą turinčius reagentus, kurių reikšmes lemia fiksuoto audinio tipas. Fiksavimo procesas vyksta dviem etapais: prefiksacija ir postfiksacija. Prefiksacijai naudoti 2,5-3% glutaraldehido (pH 7,2-7,4), fiksavimo laikotarpis yra 2-4 metai. Postfiksacija trunka 2% (pH 7,2-7,4) - 1-2 metus. Norint išsaugoti išlikusią struktūrą, rekomenduojama naudoti žemos temperatūros fiksatorių (0-4 °C), o fiksatorius ruošti naudojant fosfatinio buferio, kakodilato ir viro-nal-acetato junginius.
Skalbimas atliekama su 30% šaltu alkoholiu 5-7 kartus, odos alkoholio porcijos užtepamos ant objekto 30 minučių, po to. Išspauskite fiksatorių, kol prasidės oksidacinis fiksatoriaus veikimas.
Znevodnennya atlikti su didelės koncentracijos etilo alkoholiais: 30, 50, 70, 96, 100 % 30 minučių. Naudojant tam tikrus užpildymo būdus laistymui, rekomenduojama papildomai įpilti acetono ir propileno oksido.
Zalivannya būti laikomi epoksidinės dervos(araldit, epon ta in.). Dervų polimerizacija kapsulėse atliekama termostate 60 ° C temperatūroje, kol sukietėja, paprastai 1-2 dB ruožu.
Itin plonos akys stiklinių peilių pagalba laikykite ant ultramikrotomo, kuriam epoksidiniai blokeliai pagaląsti į daugiapusės nupjautos piramidės formą. Serijinės pilkos spalvos versijos turi būti imamos vonioje su 10% etilo alkoholiu. Iškirptos sekcijos montuojamos ant varinių arba paladžio sėdynių, ant kurių paviršiaus pirmiausia uždedamas lydalas iš formos. Norint nustatyti reikiamas struktūras, ekranuose esančios dalelės apdorojamos švino citratu ir uranilacetatu.
Dėl skenuojanti elektroninė mikroskopija Pėdsakų pėdsakus būtina fiksuoti, pagal pėdsakų pėdsakus išlaikyti geros būklės, naudoti kaip fiksatorius. Po laistymo gėlės priklijuojamos prie trimašo objekto, į instaliaciją įdedamos dildės ir uždengiamos geriausiu aukso ar platinos kamuoliuku. Vietoj elektroninės mikroskopijos, kuri yra permatoma, skenavimui galima naudoti korozinius preparatus: apdirbamas objektas užpilamas kokiomis nors kietėjančiomis medžiagomis ir po to atrodo lipnus ir paviršinis. Taip pat yra replikų, kurios eina sušalimo – skaldos keliu. Tokiu atveju reikia stebėti objekto paviršiaus įskilimą. Norint padidinti kontrastą, kopijos turi būti pagamintos iš metalo dalelių (aukso, platinos) arba vugille.
Kontroliuokite maistą
