Metodi di indagine istologica. L'istologia attuale dispone di un ampio arsenale di diversi metodi di indagine. Tutti questi metodi si basano sull'uso di un dispositivo speciale: un microscopio, e quindi sono tutti metodi microscopici.
Inizierò attentamente a indagare sull'oggetto in esame, e questi metodi saranno divisi in vitali (o sopravitali) se si esaminano cellule viventi, tessuti, organi e organismi interi, e postvitali, se si esaminano campioni fissati morti. oggetti.
Lo sviluppo del metodo postvitale, ovvero del metodo per preparare un preparato istologico permanente, avvenne parallelamente allo sviluppo della scienza istologica nell'altra metà del XIX secolo. Questo è anche chiamato il metodo dell'istologia classica. Questo metodo, chiamato tecnica istologica o microscopica, richiede la preparazione completa dell'oggetto dell'indagine. Resta oggetto di scrittura speciale, per raggiungere grandi debitori. Lo studente che inizia a studiare istologia deve familiarizzare con le tecniche base di preparazione dei preparati istologici per poter comprendere meglio i preparati ed imparare ad analizzare, a “leggere”, anche i preparati istologici più recenti.I farmaci sono largamente utilizzati sia in fase iniziale processo e nella ricerca scientifica.
La prima fase nella preparazione del farmaco è la rimozione del materiale. Questa fase, come tutti gli attacchi, è seguita dalla fine dell'ultima lesione all'oggetto. Pertanto, quando si eseguono tagli su un organo o tessuto, è necessario utilizzare coltelli e lame affilate e non schiacciare il tessuto con una pinzetta. I pezzi sono presi in piccole dimensioni - circa 1 cm3 (più di 7x7x3 mm). Il materiale deve essere fresco e deve essere prelevato il prima possibile dopo la morte di una creatura sperimentale o la morte di una persona.
La fase successiva è la fissazione del materiale, che comporta il serraggio del punto preso e il fissaggio dei bordi. Lo scopo di questa fase è il consolidamento delle strutture istologiche e delle macromolecole nel luogo in cui si trovava l'odore nell'oggetto vivente. Innanzitutto i fissativi minimizzano i cambiamenti nelle strutture stabilite, oppure si possono selezionare agenti fissativi speciali per ridurre al minimo questi cambiamenti. I fissativi includono alcoli (etile, metile), derivati della formalina, importanti sali metallici e acidi (octova, picrina, osmio). Molto spesso ci sono vari sacchetti di fissaggio pieghevoli che includono i nomi dei componenti di vari composti.
La terza fase è l'irrigazione del materiale fissato. A questo scopo vengono utilizzati alcoli di concentrazione variabile, in modo che aumentino gradualmente da 50-70 a 100 gradi. Nella fase successiva è necessaria l'impermeabilizzazione: un oggetto rinforzato, presente nella paraffina, nella cellulosa e nelle resine sintetiche. È importante che la maggior parte di queste resine non si mescoli con l'acqua e quindi, affinché penetrino nel materiale, è necessario rimuovere attentamente l'acqua dal tessuto, quindi impregnarlo con xilene (toluene, benzene), o resina, che scompone bene la paraffina, oltre a mescolarsi con alcool etilico a 100 gradi. Dopo aver infiltrato l'oggetto con paraffina rara alla temperatura di 55-5°C, si lascia indurire a temperatura ambiente insieme a paraffina in apposite forme. Ecco come controllare il blocco di paraffina. Questa procedura è chiamata riempimento. Esiste un modo più rapido per congelare gli scarti di tessuto con ghiaccio secco (anidride carbonica) o azoto raro, la struttura degli oggetti istologici studiati è preservata in tempi diversi.
Il materiale rinforzato consente la produzione di sezioni sottili (5-7 µm di spessore), sottili (0,5-1 µm) che possono essere vicorizzate per la microscopia ottica e ultrasottili vicorizzate per la visione al microscopio elettronico (0,05-0,2 µm). La preparazione delle sezioni viene effettuata su speciali dispositivi microtomici (per microscopia ottica) e dispositivi ultramicrotomici (per microscopia elettronica). Le sezioni sottili, sottili o ultrasottili sono adatte agli scambi di luce o ai fasci di elettroni con gli oggetti e consentono l'esame con microscopi di alta qualità. Per sezionare i dettagli strutturali di un oggetto, la maggior parte dei quali non hanno dimensioni naturali, è necessario separarli attraverso la necessità di preparazione (per l'imaging al microscopio ottico) o di contrasto (per la microscopia elettronica).
L'istologia ha una varietà di metodi per preparare preparati e compostare una varietà di crespini diversi, che devono essere seguiti. Istologicamente i crespini si dividono in selvatici, selvatici e sintetici (anilina). Il frutto dei fienili è l'ematossilina, che viene estratta dalla corteccia del tronco d'albero, che cresce in America Centrale, e una sostanza che si trova nelle zanzare: il pesce gatto. La maggioranza assoluta dei crespini sono sintetici: eosina, fucsina, azzurro, ecc.
La cosa più importante è la classificazione istologica dei crespini autorità chimiche, quindi ci sono una serie di termini che diventeranno più chiari durante il corso. Pertanto, secondo le autorità chimiche, i crespini istologici sono divisi in acidi, basici e neutri. Le proprietà dei crespini acidi sono classificate nei gruppi -COOH, -HS03, H2P03, chiamati crespini anionici. I mirtilli acidi contengono il citoplasma della cellulite, sono chiamati citoplasmatici. Il calcio di tali mirtilli può essere eosina (conferisce un colore ruggine brillante), verde chiaro (conferisce colore verde). Le strutture istologiche preparate con mirtilli acidi sono chiamate ossifile (acidofile, eosinofile). Questi, ad esempio, sono granuli citoplasmatici di leucociti eosinofili, fibre di collagene, ecc.
I composti principali sono cationici, l'importante è che la maggior parte di essi abbia una molecola caricata positivamente con atomi di azoto. Il nome barvnikov feconda selettivamente i nuclei delle cellule e quindi sono chiamati nucleari. Il ceppo può essere ematossilina (farb in colore blu-viola), carminio (in rosso chiaro), safranina (rosso scuro), azzurro II (in blu). Le strutture istologiche formate dai cirripedi principali sono dette basofile. Questi sono granuli nel citoplasma dei leucociti basofili, i nuclei delle cellule, ecc.
I crespini neutri si stabiliscono in presenza di varietà acquatiche di crespini acidi e basici, ad esempio il blu di metilene dell'acido eosinico. Inoltre, i crespini neutri dovrebbero essere separati se sono presenti contemporaneamente crespini basici e aspri. Le strutture che contengono crespini sia basici che acidi sono chiamate a profilo neutro o policromatofile. Il calcio può essere costituito da granuli di leucociti a profilo neutro, citoplasma di eritroblasti policromatofili, ecc. La presenza di strutture istologiche che cambiano il colore del cirripedi principale è designata con il termine metacromasia. La granularità dei leucociti basofili, del tessuto intercellulare del tessuto cartilagineo, ecc. è scortecciata metacromaticamente. Uno dei crespini più comunemente consumati è l'ematossilina e l'eosina.
Esistono creme speciali di crespino acido, basico e neutro che possono essere utilizzate per identificare voci o strutture di canto. Ad esempio, il Sudan III aggiunge tessuti grassi al colore arancione e l'orceina aggiunge fibre elastiche ai marroni.
I preparati preparati dovrebbero sciogliersi in alcoli, diventare visibili in xilolo, quindi versare una pallina sottile di balsamo del Canada e coprire con un vetro curvo. Dopo aver asciugato il balsamo, riceverai un farmaco permanente che potrai utilizzare a lungo. Per la microscopia elettronica le sezioni vengono prelevate su ultramicrotomi, poste su apposite griglie, contrastate con sali di uranio o piombo, osservate al microscopio e fotografate. Le microfotografie sono state rimosse dall'oggetto e trattate contemporaneamente con preparati istologici.
Oltre alle descrizioni delle sezioni sottili, esistono anche altri tipi di preparati istologici, che sono decisamente più rari, soprattutto in alcuni casi. Prima di loro, strisci (sangue, liquido cerebrospinale, muco, ecc.), Strisci (fegato, timo, mucosa della membrana sebacea), strisci (contenenti tessuto, pleura, membrana cerebrale, membrana miopica), preparati totali (per nascite ) fasi iniziali sviluppo, articolazione).
I metodi vitali (di sopravvivenza) per tracciare cellule e tessuti consentono di ottenere informazioni su coloro che subiscono processi vitali, tracciare l'orlo, l'orlo, la crescita e l'interazione tra i tessuti, la mia reazione a vari fattori. Per integrare questi dati, ottenuti con il metodo dell'istologia classica su cellule e tessuti umani, sono necessari i metodi di indagine consolidati. Gli studi live-in vengono condotti in un organismo vivente o in vivo. Per monitorare le cellule viventi, vengono utilizzati i metodi Vikoryst per il trattamento vitale e amministrativo. A questo scopo vengono utilizzati mirtilli speciali che non sono tossici per i tessuti viventi. In caso di fecondazione vitale, il crespino viene introdotto nel corpo di un animale vivo e le cellule di cellulosa vengono fermentate selettivamente. Pertanto, le cellule del sistema macrofagico vengono monitorate per l'introduzione di trypan blu o carminio di litio. La fermentazione sopravitale è la fermentazione di cellule vive isolate dal corpo. Ecco come vengono rivelati i lisosomi (barvnik rosso neutro), i mitocondri (verde Janus) e i reticolociti del sangue (blu diamante-cresile).
Per l'esame vitale o intravitale, nonché post-vitale di oggetti istologici non conservati, vengono utilizzati numerosi metodi speciali di microscopia ottica: contrasto di fase, campo scuro, fluorescenza.
Il metodo di espansione di fase garantisce il contrasto necessario prima di tracciare le strutture non assorbite dietro la cornice di uno speciale diaframma ad anello che si inserisce nel condensatore e la cosiddetta piastra di fase che si inserisce nell'obiettivo. Questo design dell'ottica del microscopio ottico consente di invertire i cambiamenti di fase della luce che passa attraverso l'oggetto, all'ampiezza, che segna l'occhio come cambiamento di luminosità.
Principale Oggetti di indagine Questi sono preparati istologici e il principale metodo di indagine è la microscopia.
Il campione istologico può apparire trasparente (sottile) e contrastante. Il vino viene preparato sia da strutture vive che morte (fisse). Il farmaco può essere utilizzato come sospensione di tessuto, striscio, liquido, materiale fuso, preparazione totale e sezione sottile.
Il processo di preparazione dei preparati istologici per l'esame microscopico comprende le seguenti fasi principali: 1) prelievo del materiale e sua fissazione; 2) materiale rinforzato; 3) preparazione dei campioni; 4) preparazione o contrasto delle immagini; 5) posizionamento degli occhi.
Per la preparazione vengono utilizzati speciali crespini istologici con diversi valori di pH: acido, neutro e basico. Le strutture che vengono elaborate da loro sono apparentemente chiamate ossifile, neutrofile (eterofile) e basofile.
Quali metodi utilizza la scienza istologica? L'odore è numeroso e vario:
Microscopia ottica. I microscopi di oggi producono dati ad alta risoluzione. La separazione è definita come la più piccola distanza (d) tra due punti adiacenti che possono essere separati. Questo valore va tenuto alla luce per lungo tempo (λ) ed è espresso dalla formula: d = 1/2 λ.
Il valore minimo della parte visibile è nell'ordine di 0,4 µm. Pertanto, la potenza massima del microscopio ottico diventa 0,2 micron e la capacità massima raggiunge 2500 volte.
Microscopia ultravioletta . Il valore massimo della luce ultravioletta è 0,2 micron, tuttavia, la parte separata del microscopio ultravioletto è 0,1 micron e poiché la radiazione ultravioletta è invisibile, è necessario proteggere l'oggetto monitorato: uno schermo luminescente.
Microscopia fluorescente (luminescente). La vibrazione ad onda corta (invisibile), che si affievolisce vicino ai fiumi, risveglia i loro elettroni, che sfumano in luce con l'onda più grande a lungo raggio, rimanendo nella parte visibile dello spettro. In questo modo si cercano progressi nelle singole parti del microscopio.
Microscopia a contrasto di fase Consente di visualizzare gli oggetti non salvati.
Microscopia di polarizzazione È in fase di studio lo sviluppo dell'architettura delle strutture istologiche, ad esempio la fibra di collagene.
Microscopio elettronico dà la capacità di torcere gli oggetti, aumentando decine di migliaia di volte.
Microfotografia e microcinema . Questi metodi consentono di catturare oggetti in fotografie e vivere oggetti microscopici in Russia.
Storia –e citochimica , incluso kolkisna, consente una chiara analisi dei seguenti oggetti a livello tissutale, cellulare e subcellulare.
Citospettrofotometria Permette di lavorare a maglia kilkisny invece di questi e altri materiali biologici in tessuti e tessuti a base di dovezhiny di colore chiaro color argilla con il fienile lavorato a maglia con essi.
Centrifugazione differenziale Permette di separare le cellule che sono separate l'una dall'altra dalla loro stessa massa.
Radiografia Si basa sull'inclusione di un tracciante radioattivo (ad esempio iodio radioattivo, N-timidina, ecc.) nel processo di scambio.
Morfometria consente di misurare l'area e il volume delle cellule, dei loro nuclei e degli organi utilizzando l'oculare aggiuntivo di micrometri e griglie speciali.
Zastosuvannya EOM per l'elaborazione automatica di materiale digitale.
Metodo della coltura dei tessuti Sostiene la vitalità del corpo e la struttura delle cellule e dei tessuti. A questo scopo vengono creati contenitori speciali con un mezzo vivente, in cui vengono create tutte le sostanze necessarie per la vita delle cellule. Utilizzando questo metodo, è possibile studiare la differenziazione e la formazione funzionale delle cellule, i modelli della loro degenerazione maligna e lo sviluppo del processo di rigonfiamento, l'interazione interclinare, il livello delle cellule e dei tessuti da parte di virus e microrganismi. farmaci medicinali sui processi di scambio nei clienti e nei tessuti, ecc.
Prizhitteve (vitalne) farbuvannya Viene utilizzato per studiare le manifestazioni della fagocitosi e l'attività dei macrofagi, la filtrazione dei canali neuronali, ecc.
Metodo di trapianto di tessuti. Questo metodo si basa sul metodo di modifica del comportamento delle cellule e del loro stato morfofunzionale quando vengono trapiantate in un altro organismo. Ad esempio, questo metodo viene utilizzato per sostenere la vita di creature sufficientemente forti da ricevere una dose letale.
Micromanipolazione. Questo metodo si basa sulla biologia molecolare, sull'ingegneria genetica e anche sulla clonazione, quando, utilizzando un micromanipolatore, viene rimosso il nucleo di una cellula uovo con un corredo cromosomico aploide e in esso viene trapiantato il nucleo di una cellula somatica con un insieme diploide di cromosomi.
Oggetto di istologia. Metodi di indagini istologiche. La teoria di Klitin.
INTRODUZIONE ALL'ISTOLOGIA. BUDOVA KLITINI.
Lezione 1
Istologia– questa è la scienza della vita, dello sviluppo e della vitalità dei tessuti della materia. I tessuti sono tessuti da corpi viventi e non viventi. L'esame degli oggetti istologici e delle loro strutture sottili viene effettuato con l'ausilio di microscopi, che ingrandiscono centinaia di migliaia di dettagli invisibili ad occhio nudo.
Il corso di istologia è intelligentemente suddiviso nelle seguenti sezioni:
1. La citologia è la scienza delle cellule.
2. L'embriologia è la scienza dello sviluppo, dalla nascita alla formazione finale del corpo.
3. L'istologia segreta è la scienza dei modelli segreti che governano i tessuti.
4. Istologia privata: la scienza di Budova, lo sviluppo di organi e sistemi.
Il compito principale dell'istologia come materia è acquisire conoscenze sui tessuti microscopici e ultramicroscopici, sui tessuti degli organi e sui sistemi di un corpo sano, nonché sulla connessione neurologica con il loro sviluppo e le funzioni stabilite.
I principali metodi di esame istologico sono la microscopia e metodi speciali (non microscopici) (istochimica, citofotometria, autoradiografia, ecc.).
Gli oggetti di indagine possono essere cellule e tessuti vivi o morti (fissi).
Per esaminare cellule e tessuti, i preparati istologici vengono preparati al microscopio.
I metodi principali per l'esame degli oggetti istologici sono la microscopia ottica e la microscopia elettronica, ampiamente utilizzate nella pratica clinica e sperimentale.
Microscopi ottici leggeri. La parte ottica principale del microscopio è ripiegata nella lente e nell'oculare. L'obiettivo ha il sistema ottico più affidabile, che fornisce un'immagine più ampia del soggetto. Un oculare è un sistema ottico che funge da lente d'ingrandimento mentre cattura visivamente l'immagine più grande di un oggetto fornita dall'obiettivo. L'oculare produce immagini più grandi a 5-25 volte.
Quindi le caratteristiche più importanti di un microscopio sono la sua efficienza e l'ingrandimento. Separatezza - distanza minima tra due punti dell'oggetto, come può essere vista dall'esterno. L'ingrandimento del microscopio è un valore che indica quante volte le dimensioni lineari dell'immagine formata dal sistema ottico del microscopio sono maggiori delle dimensioni lineari dell'oggetto. Un microscopio più grande deriva da una lente e da un oculare più grandi e una fornitura numericamente maggiore di questi aumenta. I microscopi ottici di oggi variano fino a 1500 volte.
Microscopio elettronico I microscopi elettronici presentano un elevato livello di diversità. In altre parole, in un microscopio elettronico è teoricamente possibile potenziare i singoli dati e aumentare apparentemente l'immagine 150.000 volte maggiore di quella di un microscopio a pari ottica. Molto spesso, nelle indagini morfologiche, vengono utilizzati i microscopi elettronici, che consentono di misurare l'area dell'immagine dell'oggetto indagato. In futuro, i microscopi elettronici raster (a scansione) verranno utilizzati attivamente per creare immagini banali al fine di ottenere più spazio per l'imaging delle strutture.
Metodi per l'indagine quantitativa delle microstrutture in preparati istologici e citologici. Una valutazione approfondita delle microstrutture è una necessaria identificazione mentale di dati oggettivi sul loro stato in condizioni normali, negli studi sperimentali e in patologia. I principali indicatori delle microstrutture sono morfometrici (il numero di strutture e i loro parametri geometrici) e densitometrici, che riflettono la concentrazione (potere ottico) discorsi chimici nelle microstrutture. Per identificare questi parametri vengono utilizzati metodi morfometrici e spettrofotometrici, nonché sistemi automatizzati di elaborazione delle immagini.
La scansione dell'organismo a livello tissutale e cellulare richiede la preparazione di preparati istologici e il loro esame al microscopio. Il metodo di preparazione di un preparato istologico consiste nel preparare il materiale per l'esame al microscopio al fine di ottenere chiarezza e contrasto.
Spesso, applicare il materiale per un aspetto nuovo è la soluzione più efficace (ad esempio, prendersi cura del lavoro dell'epitelio migratorio). Per preparare la preparazione, prendi un oggetto pulito. Mettere al centro una goccia d'acqua o una soluzione fisiologica, avvolgervi i campioni di tessuto per poterli osservare facilmente e, sotto il controllo del microscopio, raddrizzarli con le teste dissezioni.
Per rendere la preparazione più contrastante e ridurre la capacità di separare bene i suoi dettagli, l'oggetto viene sottoposto a preparazione. Allo stesso tempo, vale la pena notare che diverse strutture di tessuti e cellule reagiscono in modo diverso tra loro.
La preparazione dei preparati permanenti può richiedere molto tempo e tali preparati possono essere elaborati per un lungo periodo di tempo. Le preparazioni vengono preparate da piccoli oggetti interi (preparazioni totali) o sezioni; Per tutte le menti, l'oggetto attraverso la lente è sottile e penetrante, altrimenti è impossibile esaminarlo al microscopio.
La preparazione del farmaco consiste in diverse fasi.
2. Oggetti dell'indagine istologica
3. Preparazione di preparati istologici
4. Metodi di indagine
5. Fasi storiche nello sviluppo dell'istologia
1. Istologia la scienza della vita microscopica e submicroscopica, dello sviluppo e della vitalità dei tessuti degli organismi viventi. Inoltre, l'istologia è uno degli aspetti principali dell'organizzazione dei tessuti viventi. Questi sono separati Uguali gerarchici organizzazione della materia vivente:
clitoride;
tessile;
unità strutturali e funzionali degli organi;
rabarbaro d'organo;
rabarbaro sistema;
rabarbaro biologico
L'istologia come disciplina iniziale, comprende le seguenti sezioni: citologia, embriologia, istologia esterna (che coinvolge le funzioni biologiche dei tessuti), istologia privata (che coinvolge l'esame microscopico degli organi).
L'oggetto principale Lo studio dell'istologia riguarda il corpo di una persona sana e pertanto la disciplina originaria si chiama istologia umana.
Compito principale L'istologia si riferisce alle cellule ferite, ai tessuti, agli organi, alla creazione di legamenti tra vari oggetti, alla creazione di modelli nascosti.
L'istologia, come l'anatomia, si estende alle scienze morfologiche, da capogiro varie modificazioni delle strutture dei sistemi viventi. Invece dell’anatomia, l’istologia studia la materia vivente a livello microscopico ed elettronico. In questo caso, la modifica dei vari elementi strutturali verrà effettuata in questo momento in conformità con le funzioni loro assegnate. Questo approccio all'impianto di strutture della materia vivente è chiamato istofisiologico e spesso viene chiamata istologia istofisiologia. Inoltre, con la materia vivente impiantata a livello cellulare, tissutale e di organi, non solo si può vedere la forma, la dimensione e la distribuzione delle strutture, ma piuttosto viene spesso determinato il metodo della cito-istochimica e il tipo di discorso in cui questi vengono impiantati. le strutture creano. Le strutture che si sviluppano devono essere esaminate in relazione al loro sviluppo, sia durante il periodo intrauterino (embrionale) che durante tutta l'ontogenesi postembrionale. Ciò spiega anche la necessità di includere l'embriologia prima del corso di istologia.
L'istologia, come scienza, ha la sua oggetti e metodi Questo è tutto. Gli oggetti più comuni utilizzati per l'innesto sono tessuti, frammenti di tessuto e organi, preparati in modo speciale per l'innesto al microscopio.
2. Oggetti di indagine sono divisi in:
vivo (clini in gocce di sangue, clitini in coltura e altri);
morto o fisso, che può essere prelevato da un organismo vivente (biopsia) o da cadaveri.
In ogni caso, una volta presi i pezzi di carta, la puzza cede ad eventuali problemi di fissaggio o di congelamento. Per scopi scientifici e di base vengono utilizzati oggetti fissi. I preparati così preparati e poi analizzati per l'esame al microscopio sono chiamati preparati istologici.
Campione istologico Puoi vedere:
tessuto d'organo sottile e barrato;
spalmare sulla pelle;
impatto sulla pelle di un organo rotto;
preparazione per sputi sottili.
Una preparazione istologica di qualsiasi forma è colpevole dei seguenti effetti:
salvare la vita delle strutture;
Assicurati di essere magro e chiaro per esaminarlo al microscopio alla luce che passa;
Se è contrastante, le strutture che cambiano sono chiaramente visibili al microscopio;
I preparati per la microscopia ottica devono essere conservati e riutilizzati per lungo tempo.
Questi possono essere raggiunti entro un'ora dalla preparazione del farmaco.
3. Guarda questo fasi di preparazione del preparato istologico
Prendi il materiale(Un pezzo di tessuto o organo) per preparare il farmaco. In questo caso, la raccolta del materiale deve essere effettuata prima della morte o della morte dell'animale, e se possibile, sotto forma di oggetto vivente (biopsia), in modo che le strutture del corpo, tessuto o organo siano meglio conservate ; Il parcheggio delle cuciture deve essere effettuato utilizzando uno strumento standard, in modo da non danneggiare il tessuto; Non è necessario che il tessuto dell'articolo sia eccessivamente esteso di 5 mm, in modo che il segno di fissaggio possa penetrare nel tessuto dell'articolo; Gli oggetti devono essere contrassegnati (il nome del corpo, il numero della creatura o il soprannome della persona, la data di raccolta, ecc.)
Fissazione del materiale necessario per accelerare i processi metabolici e preservare le strutture dal decadimento. Il fissaggio si ottiene molto spesso utilizzando un cuneo di carta in un mezzo di fissaggio, che può essere semplice alcoli e formalina e agenti pieganti di Carnoy, fissativo di Zinker e altri. Il fissativo provoca la denaturazione delle proteine e quindi accelera i processi metabolici e preserva le strutture nel loro stato originale. La fissazione può essere ottenuta anche mediante congelamento (raffreddamento con CO2, azoto raro, ecc.). La gravità della fissazione è determinata dall'ultimo strato di tessuto cutaneo o organo.
Riempimento di vestiti al centro della gola(paraffina, integrali, resine) o congelamento per l'ulteriore preparazione di sezioni sottili.
Preparazione delle fette su strumenti speciali (microtomia o ultramicrotomia) con l'ausilio di coltelli speciali. Le fette per la microscopia ottica sono incollate su un vetrino e per la microscopia elettronica sono montate su reti speciali.
Zabarvlennya zríziv oppure non c'è contrasto (per la microscopia elettronica). Prima di bloccare i tagli, viene rimossa la parte centrale ispessita (deparaffinazione). I barili ottengono il contrasto delle seguenti strutture. I crespini si dividono in basici, acidi e neutri. I più utilizzati sono i crespini basici (chiamati ematossilina) e gli acidi (eosina). I cirripedi pieghevoli spesso crescono in modo vikoristico.
Illuminazione degli occhi(in xilene, toluene), posto in resina (balsamo, polistirolo), ricoperto da un vetro curvato.
Dopo queste procedure sequenziali, il farmaco può essere esaminato al microscopio ottico.
Per scopi di microscopia elettronica nelle fasi di preparazione dei preparativi ci sono delle particolarità, ovvero dei principi fondamentali stessi. La preoccupazione principale risiede nel fatto che la preparazione istologica per la microscopia ottica può essere preservata per un momento difficile ed è esente da contaminazioni. Le fette per la microscopia elettronica sono monouso. Quando viene preparato il primo oggetto, è necessario espellere, fotografare e l'impianto delle strutture viene effettuato utilizzando elettronogrammi.
Da tessuti di rara consistenza I preparati (sangue, liquido cerebrospinale, ecc.) vengono preparati dall'aspetto di uno striscio su un vetrino, che vengono anche fissati, preparati e quindi testati.
Zi fragili organi parenchimali(fegato, nirka e altri) vengono preparati preparativi per l'aspetto dell'organo: dopo un organo rotto o rotto, sull'organo fratturato viene applicato un oggetto, sul quale sono incollate le decalcomanie del tessuto. Quindi il farmaco viene fissato, preparato e somministrato.
Zrestha, dai corpi attivi(brezza, polpa della membrana cerebrale) o da soffice tessuto composito fibroso, i preparati per la flottazione vengono preparati allungando o schiacciando tra due bicchieri, anche con fissazione a gradini, scortecciatura e colata di resina.
4. Il principale metodo di indagine oggetti biologici che vengono analizzati in istologia bagno per microscopio, Cioè l'esame dei preparati istologici al microscopio. La microscopia può essere un metodo di trattamento indipendente, ma per il resto è possibile utilizzare altri metodi (istochimica, istoradiografia, ecc.). Vale la pena ricordare che per la microscopia vengono utilizzati diversi modelli di microscopi che consentono di leggere diversi parametri degli oggetti da misurare. Questi sono separati tipi di microscopia:
microscopia ottica (dimensione separata 0,2 µm) il tipo più avanzato di microscopia;
microscopia ultravioletta (dimensione separata 0,1 micron);
microscopia luminescente (fluorescente) per identificare sostanze chimiche in strutture visibili;
microscopia a contrasto di fase per l'impianto di strutture in preparati istologici non conservati;
microscopia di polarizzazione per impianto, rango della testa, strutture fibrose;
microscopia in campo oscuro per l'imaging di oggetti viventi;
Microscopia a luce incidente per l'esame di oggetti solidi;
Elektronna Mikroscopy (Rodlnu Building fino a 0,1-0,7 Nm), due ї RISNOVIDIS (Transmіsіina) Elekroscope I Smanirov Miroproscope of the Divine Divine Superput.
Metodi istochimici e citochimici consente di determinare lo stoccaggio di sostanze chimiche e determinarne la resistenza nelle strutture sottoposte a trattamento. Il metodo si basa su reazioni chimiche effettuate con un reagente e sostanze chimiche presenti nel substrato, con un prodotto di reazione creato (contrasto o fluorescente), che viene poi rilevato alla luce o luminescente e al microscopio.
Metodo istoautoradiografico permette di identificare lo stoccaggio di sostanze chimiche nelle strutture e l'intensità dello scambio per l'inclusione di isotopi radioattivi per tracciare le strutture. Il metodo viene spesso utilizzato negli esperimenti sugli animali.
Metodo della centrifugazione differenziale consente di attorcigliare organelli e frammenti di filo visibili dal tessuto. A questo scopo si macina il tessuto dell'organo, lo si riempie con la soluzione fisiologica, quindi lo si centrifuga in una centrifuga con involucri diversi (da 2 a 150mila) e si separano le frazioni che verranno raccolte, che poi verranno raccolte. Sperano di utilizzare metodi diversi.
Metodo dell'interferometria consente di determinare la massa secca del discorso negli oggetti viventi e fissi.
Metodi immunomorfologici consente, oltre alle reazioni immunitarie preliminari, sulla base dell'interazione antigene-anticorpo, di identificare sottopopolazioni di linfociti, di determinare lo stadio di estraneità delle cellule, di effettuare la tipizzazione istologica di tessuti e organi в (che significa istosuicienza) per il trapianto di organi .
Metodo della coltura del clitino(in vitro, in vivo) rilevamento di cellule in campioni o in capsule speciali nel corpo e ulteriore analisi delle cellule viventi al microscopio.
Ci sono solo poche specie studiate in istologia
Per visualizzare le strutture al microscopio ottico, i micrometri sono importanti: 1 µm diventa 0,001 mm; nella microscopia elettronica, cambia nanometri: 1 nm diventa 0,001 micron.
5. U storia dello sviluppo dell'istologia mentalmente vedi tre periodo:
Periodo premicroscopico(dal IV secolo a.C. al 1665 r.) associato ai nomi di Aristotele, Galeno, Avicenna, Vesalio, Falopia ed è caratterizzato da prove di visione di tessuti eterogenei (duri, molli, rari ecc.) nel corpo di animali e umani e i migliori metodi di dissezione anatomica
Periodo microscopico(dal 1665 al 1950). L'inizio del periodo è associato ai nomi del fisico inglese Robert Hooke, che per primo migliorò il microscopio (ricordiamo che i primi microscopi furono trovati all'inizio del XVII secolo), in altre parole, per la un'indagine sistematica dei risultati, quel numero di oggetti biologici e la pubblicazione dei risultati di questi studi in 1665 rubli. Nel libro “Micrografia”, nel terzo, primo secolo, fu introdotto il termine “klitina” (“cellulo”). È continuato l'ulteriore sviluppo dei microscopi e l'ulteriore sviluppo dei loro tessuti e organi biologici.
Particolare rispetto è stato dato al vigneto di Budova. Jan Purkinje descrisse la presenza di "protoplasma" (citoplasma) e di nuclei nelle cellule delle creature, e successivamente R. Brown confermò la presenza di nuclei e cellule nella maggior parte delle creature. Il botanico M. Schleiden si è occupato dell'attività delle cellule dotate di citocinesi. I risultati di questi studi permisero a T. Schwan, sulla base delle loro informazioni, di formulare la teoria di Clint (1838-1839) in termini di tre postulati:
tutti gli organismi in crescita e creati sono composti da cellule;
tutte le cellule si sviluppano secondo il principio fondamentale dei citoblastomi;
La cellula della pelle ha una vitalità indipendente e la vitalità del corpo è la somma dell’attività delle cellule.
Tuttavia, R. Virkhov (nato nel 1858) non ha chiarito che lo sviluppo delle cellule è influenzato dal percorso sotto la cella di uscita (se la cella proviene dalla cella). I principi sviluppati da T. Schwan, la teoria climatica, sono ancora attuali, sebbene formulati in modo diverso.
Disposizioni attuali della teoria cellulare:
la cellula è la più piccola unità degli esseri viventi;
cellule di creature e organismi simili al loro nucleo familiare;
La riproduzione delle cellule è generata da un percorso sotto la cella di uscita;
Gli organismi multicellulari sono insiemi complessi di cellule e simili, uniti in sistemi di tessuti e organi, interconnessi da forme di regolazione cellulare, umorale e nervosa.
L'ulteriore sviluppo dei microscopi, in particolare l'uso di lenti acromatiche, ha permesso di identificare diverse strutture nelle cellule:
Centro clinico Hertwig, 1875;
apparato particellare o complesso piastra-parziale Golgi, 1898;
I mitocondri di Bend, 1898
Fase attuale Lo sviluppo dell'istologia iniziò nel 1950. Dall'inizio della scoperta del microscopio elettronico, l'impianto di oggetti biologici, sebbene il microscopio elettronico sia stato trovato prima (E. Ruska, M. Knoll, 1931). Tuttavia, l'attuale fase di sviluppo dell'istologia è caratterizzata dall'uso non solo del microscopio elettronico, ma anche di altri metodi: istochimica citochimica, istoradiografia e altri metodi esagerati. In questo caso viene utilizzato un complesso di tecniche eterogenee, che consentono non solo indicazioni chiare sulle strutture interessate, ma anche l'individuazione di caratteristiche precise. Particolarmente utilizzate sono varie tecniche morfometriche basate su sistemi automatizzati per l'elaborazione delle informazioni acquisite mediante computer.
Lezione 2. Citologia. Citoplasma
Gli oggetti di indagine possono essere cellule e tessuti fissi (morti) o viventi.
Per studiare la microstruttura di formaggi e prodotti alimentari, di norma vengono utilizzati vicoristici di tessuti e tessuti fissi. I farmaci sono istantanei, destinati a un'iniezione una tantum, o permanenti, che possono essere conservati e ampiamente monitorati. Inoltre, vengono utilizzate preparazioni totali e complete.
Preparativi tempestivi Puoi preparare uno shvidko a padella piatta; A questo scopo si fissa il materiale e si realizzano delle sezioni su un microtomo congelato; se disponibile, si può realizzare una sezione sottile di tessuto o organo con un bisturi o una lama. Sbucciare le sezioni tagliate, posizionarle su un vetrino, quindi applicare una goccia di glicerina e coprire con un vetro curvo. Per identificare l'amido, sciogliere lo iodio nello ioduro di potassio: sciogliere 0,5 g di ioduro di potassio in una piccola quantità di acqua, aggiungere 1 g di ioduro cristallino e aggiungere acqua a 100 cm 3 . Applicare una spolverata di reagente su un pezzetto sottile di spigola, polvere o altro materiale, steso su un vetrino, e l'amido assumerà una colorazione blu-viola.
Preparazioni totali o complete traccia senza rimuovere il tessuto dell'organo. Ad esempio, un versamento di cellulosa sottocutanea o un preparato frantumato di radice dopo la fissazione, il lavaggio e la preparazione devono essere posti tra l'oggetto e il vetro curvo. Per identificare gli altri elementi strutturali di pezzi fissati e fermentati di cellule pelviche o di tessuto carneo liscio, spennare con la pelle nuda su un vetrino: tali preparazioni sono chiamate pizzicature. In alcuni casi, ad esempio, dopo aver fissato e lavato la corteccia, non rimuovere la miscela, poiché nelle cellule sono presenti inclusioni organiche (pigmento), che possono essere zabarvlennya naturale.
Metodi per preparare un campione istologico Il metodo principale per innestare cellule e tessuti fissati è istologico. indagine del tessuto barrato, collocato presso un apposito centro. Per rimuovere i tagli, versare il materiale finito in paraffina o materiale intero, che consente di tagliare tagli sottili (5-7 µm o 10-30 µm in orizzontale), per una preparazione uniforme delle fette (40-60 µm) utilizzare l'attrezzatura che congelare.
Le fasi principali della preparazione di un preparato istologico: campionamento, fissazione, lavaggio, irrigazione, versamento fino alla paraffina o intero, preparazione, posa sotto una superficie curva.
Selezione del campione effettuate per garantire un’indagine e una struttura adeguate del materiale. La dimensione del campione non deve superare in media 2,5-3,0 cm Dalla capsula vengono prelevati campioni di fegato e milza. Dal cuore vengono rimossi i frammenti del cuore anteriore, i frammenti della membrana sono più sottili e su un preparato è possibile determinare l'aspetto topografico dell'epicardio, del miocardio e dell'endocardio. Dal fondo si disegnano i linfonodi e le ghiandole sovraneurali, sezioni di organi, in modo che l'angolo sia perpendicolare alla superficie in modo che sulla preparazione siano visibili le vene cervicali e cerebrali. Se è necessario preparare preparativi per il cambio di organi, i ritagli del materiale tracciato vengono tagliati in corrispondenza del cordone con la zona interessata, in modo che il campione abbia perso la zona di transizione della cavità. I campioni di muscolo scheletrico devono essere tagliati in modo che le fibre della carne si trovino nelle sezioni posteriori e trasversali. Disporre i campioni di carne macinata, carne e altri ingredienti precedentemente setacciati su un pezzo di garza e legarli con il filo. È importante notare che quando la cavità toracica cresce, le gambe collassano a causa dell'elasticità, il che significa che perdono la loro leggerezza, quindi inserisci un vetro o un tubo umico nella trachea degli organi respiratori e iniettali gradualmente attraverso di essa . Applicare una legatura di sutura alla trachea sotto il tubo inserito e legare una sutura per la chiusura completa. Per fissare l'intestino, legare prima la sezione con legature su entrambi i lati all'organo designato per la fissazione. I campioni sono timbrati con etichette di carta spessa riportanti il numero e la data di selezione del campione.
Fissazione, tobto. salvare l'architettura naturale (vivente), che viene effettuata per trasferire il protoplasma vivente delle strutture in uno stato immutabile. L'effetto dei fissativi si manifesta nel fatto che nei tessuti e negli organi, a seguito di processi biofisici, si verifica una coagulazione irreversibile delle proteine. Prelevando tessuto da un organo, è meglio bloccarlo in un fissatore; Il rapporto tra il materiale e il rapporto di fissaggio non è inferiore a 1:9 (Fig. 3).
La fissazione porta ad un certo rafforzamento e cambiamento del dovere di espressione. I più comunemente usati per la fissazione sono formaldeide al 10-12%, alcol etilico e acetone. Per preparare la concentrazione specificata di agente fissante, la formaldeide al 40% viene diluita con acqua di rubinetto. In questi casi si utilizza l'alcol etilico (100% assoluto o 96%) se è necessario identificare sostanze disciolte in fissativi acquosi (ad esempio glicogeno). Il materiale di ricerca (ad esempio il cervello) viene fissato nell'acetone per più di qualche anno. Se l'organo interessato, come il tessuto cistico, deve essere rimosso, viene eseguita la decalcificazione o l'infiammazione. Per fare ciò, immergere un pezzettino di pennello (o meglio appenderlo a un filo) in una soluzione di acqua al 5-8% acido nitrico, che viene cambiato 2-3 volte per pezzo.Il risultato della decalcificazione si può giudicare inserendo una testina sottile nello spazzolino: se non c'è supporto la decalcificazione è completata. Dopo un tale pro-
Lavaggio essere effettuato per rimuovere la parte ostinata del fissativo, ad esempio, dopo il fissaggio con formalina, si effettua il risciacquo con acqua corrente del rubinetto.
Znevodnennya per indurire il materiale in alcool etilico con concentrazione iniziale: 50-70-100. Per preparare alcol al 50% e al 70%, diluire l'alcol al 96% con acqua distillata. Per preparare l'alcol al 100%, è necessario friggere il solfato di rame fino a completa irrigazione e aggiungere alcol etilico al 96% alla polvere bianca. Alla concentrazione cutanea di alcol, il materiale dura da 1 a 24 anni a seconda delle dimensioni del tessuto, dell'organo; Con il 70% di alcol, il materiale può essere tagliato allungando diversi dib.
Zalivannya essere effettuato in modo tale che il follow-up degli occhi diventi difficile, il che consente di mantenere visioni sottili. A tale scopo utilizzare paraffina (periodo di permeazione 1-4 anni), materiale intero (periodo di permeazione tre anni). Se vengono rilevati grassi, quindi per tracciare tessuti e organi soffici, versare la gelatina.
Vista utilizzare microtomi a slitta o rotanti. Le sezioni più sottili (5-7 micron) possono essere preparate da materiale incorporato in paraffina. Il materiale caricato con solidin viene preparato con uno spessore di 15-20 micron. Per studiare la microstruttura del formaggio e dei prodotti alimentari, di norma, viene utilizzata la tecnologia di congelamento. Ciò accelera la preparazione del farmaco e le tre fasi di irrigazione e allagamento vengono disattivate. Dopo la fissazione e il lavaggio, i tessuti dell'oggetto vengono posti su un microtomo morbido, che viene congelato, e tagliati in sezioni di 40-60 µm di spessore. I mirini vengono portati con un penzlik nell'acqua e il fetore si raddrizza, gonfiandosi con l'apparizione dei più sottili grumi grigi.
Preparazione dei prodotti per aumentare il contrasto di varie strutture nei preparati destinati all'esame al microscopio ottico. Il processo di farbing coinvolge processi chimici e fisici complessi, quindi quando si sceglie un metodo, garantire la consistenza selettiva delle strutture tissutali agli uccelli canori con diverse proprietà fisiche e chimiche.
I crespini si dividono in base (basale), aspri e speciali. Vengono chiamate le strutture che vengono approntate dai principali barbari basofilo, mirtilli acidi - ossifilico, acidofilo, eosinofilo.
I mirtilli principali (basiali) contengono ematossilina, che prepara i nuclei della cromatina e altre strutture che contengono proteine, blu o viola; Carminio, che costituisce il nocciolo di ciliegie chiare, safranina - ciliegie scure, tionina - blues.
Dai fienili acidi si aggiunge l'eosina (inietta il citoplasma nell'erisipela), l'acido picrico (colore giallo), il magenta (colore precoce), il carminio indaco (colore blu).
Quando è stata studiata la microstruttura del formaggio e dei prodotti alimentari, molto spesso viene combinata con ematossilina ed eosina. A questo scopo trasferire l'ematossilina dall'acqua per 1-3 minuti; Per 20-30 minuti sciacquare con acqua, per 3-5 minuti mettere l'eosina in bocca e per 3-5 minuti risciacquare con acqua. Si elimina l'acqua persa con una carta da filtro, si applica una goccia di alcool etilico al 96% per 1-2 minuti e si annaffia con una soluzione di acido fenico al 25% in xilene o toluene. Quindi applicare 1-2 gocce di balsamo sul taglio e coprire con un bordo curvo.
Per i barvniki, che preparano inclusioni grasse, spesso vikorista Sudan 111. Per preparare il rosmarino barvnik in 95 cm 3 di alcol etilico all'85%, aggiungere 5 cm 3 di acetone e versare la polvere di Sudan III fino a rimuovere la rosa imbevuta (anche i barvniki devono essere strofinati tanto). La miscela viene riscaldata al 50% e filtrata. I campioni, prelevati su un microtomo congelato, vengono posti in alcool etilico al 50% per 1-2 minuti, e poi in Sudan III per 25 minuti. Sciacquare gli occhi con alcool al 50%, sciacquare con acqua distillata e metterli in gelatina di glicerina.
Gocce di grasso neutro vengono virate in arancione allo scopo di scomporre il Sudan III nei grassi. Le inclusioni di grasso possono essere rilevate anche con l'acido osmico e le strutture grasse diventano nere.
Vysnovok sotto il pendio curvo effettuare al centro, in modo da non far entrare il vento e conservare a lungo il taglio. Il liquido deve essere diluito con alcoli di potenza crescente e posto sotto la superficie in jalic, balsamo canadese o gelatina di glicerina (il farmaco non deve aderire ad alcoli o xilene).
Preparazione dei preparati prima della microscopia elettronica. Per studiare oggetti biologici vengono utilizzati due tipi di microscopi elettronici: trasmissione (trasmissione) e scansione (raster).
Il principio di elaborazione di un oggetto da esaminare in un microscopio elettronico, che è traslucido, si basa sugli stessi principi dei microscopi ottici: campionamento, fissazione, lavaggio, disidratazione, colata, preparazione di immagini ultrasottili, contrasto.
Selezione del campione effettuato con lo scopo di studiare la struttura del materiale, seguendo le stesse regole della microscopia ottica. Il volume delle strisce del materiale finito non deve superare 1 mm3. L'obiettivo principale della metafissazione è preservare il tessuto yakmog il più vicino possibile alla sua vita normale.
Fissazione effettuato per la migliore conservazione delle strutture, è necessario congelare reagenti che influenzano il pH e l'isotonicità, i cui valori sono determinati dal tipo di tessuto che viene fissato. Il processo di fissazione viene effettuato in due fasi: prefissazione e postfissazione. Per la prefissazione, utilizzare glutaraldeide al 2,5-3% (pH 7,2-7,4), il periodo di fissazione è di 2-4 anni. La post-fissazione dura il 2% (pH 7,2-7,4) - 1-2 anni. Per preservare la struttura sopravvissuta, si consiglia di utilizzare un fissativo a bassa temperatura (0-4 °C) e preparare fissativi utilizzando tampone fosfato, cacodilato e composti viro-nal-acetato.
Lavaggio effettuato con alcool freddo al 30% per 5-7 volte, vengono applicate sull'oggetto porzioni di pelle di alcol per 30 minuti, quindi. Spremere il fissativo fino all'inizio dell'azione ossidativa del fissativo.
Znevodnennya effettuare con alcoli etilici ad alta concentrazione: 30, 50, 70, 96, 100% per 30 minuti. Quando si utilizzano determinati metodi di riempimento per l'irrigazione, si consiglia di aggiungere inoltre acetone e ossido di propilene.
Zalivannya essere trattenuto resine epossidiche(araldit, epon ta in.). La polimerizzazione delle resine in capsule viene effettuata in un termostato a 60 ° C fino all'indurimento, solitamente con un allungamento di 1-2 dB.
Occhi ultrasottili tenere con l'aiuto di coltelli di vetro su un ultramicrotomo, per il quale i blocchi epossidici vengono affilati a forma di piramide tronca a più lati. Le versioni seriali del colore grigio devono essere prese in un bagno con alcol etilico al 10%. Le sezioni ritagliate sono montate su sedi in rame o paladium, sulla cui superficie viene prima applicata la fusione dello stampo. Per identificare le strutture necessarie, le particelle sugli schermi vengono trattate con citrato di piombo e acetato di uranile.
Per microscopia elettronica a scansioneÈ necessario fissare le tracce delle tracce, mantenerle in buone condizioni secondo le tracce delle tracce e usarle come fissativi. Dopo l'irrigazione, i fiori vengono incollati sull'oggetto trimach, le lime vengono posizionate nell'installazione e ricoperte con la sfera più pregiata d'oro o di platino. Invece della microscopia elettronica, che è traslucida, per la scansione possono essere utilizzati preparati corrosivi: l'oggetto del trattamento viene versato con qualche tipo di sostanza indurente e dopo questo appare appiccicoso e superficiale. Esistono anche repliche che seguono il percorso del congelamento - scheggiatura. In questo caso è opportuno osservare la scheggiatura della superficie dell'oggetto. Per aumentare il contrasto, le repliche devono essere realizzate mediante limatura di particelle metalliche (oro, platino) o vugille.
Controllare il cibo
